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  • 發布時間:2020-06-22 14:49 原文鏈接: 高純度exosomes分離方法

    外泌體(Exosomes)是一種直徑在40~100 nm的圓形單層膜結構,可由機體眾多類型細胞釋放,并廣泛分布于唾液、血漿、乳汁、尿液等體液當中。外泌體可攜帶多種蛋白質、mRNA、miRNA,參與細胞通訊、細胞遷移、血管新生和腫瘤細胞生長等過程。2007 年,Valadi等發現細胞分泌的外泌體中含有生物學活性的mRNA、microRNA,使得研究人員對外泌體的研究熱情激增。

    傳統的外泌體分離要涉及超速離心,操作繁瑣、過程冗長,所得到的外泌體純度較低。美國101Bio提供的系列外泌體分離試劑盒,可從細胞培養基或血清中富集大量完整的外泌體,試劑盒具有

    ü  方便——無需超速離心;

    ü  快捷——不到2個小時即可完成外切體分離純化;

    ü  高回收率——是超速離心的5~10倍;

    ü  高純度——所得外切體純度高達95% 以上;

    ü  僅需2ml的細胞培養基或200ul血清,即可獲得足夠的外切體用于下游研究。

    PureExo?Exosomes Isolation Kit for Cell Culture Media

    試劑盒組分

    Solution A、Solution B、Solution C和PureExo? Columns

    操作步驟

    1.  無血清培養或血清饑餓48小時的細胞培養液于4℃ 600 g 離心10mins取上清;

    2.  在玻璃管中按照比例加入細胞上清液及ABC混合液搖勻;

    3.  于4℃孵育1h后出現分層;

    4.  棄上層培養基,并將其余液體轉移至EP管;

    5.  1000g離心3mins,出現分層,棄上層培養基及下層無色澄清液體;

    6.  上述步驟重復操作一次;

    7.  室溫干燥5~10mins后用1X PBS重懸;

    8.  重懸液轉移至純化柱中,2000g離心5mins;

    9.  收集流出液即為外切體。


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