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  • 發布時間:2020-06-15 23:00 原文鏈接: 高速離心機技術在生物學上的應用(二)

    ⑶區帶轉頭:區帶轉頭無離心管,主要由一個轉子桶和可旋開的頂蓋組成,轉子桶中裝有十字型隔板裝置,把桶內分隔成四個或多個扇形小室,隔板內有導管,梯度液或樣品液從轉頭中央的進液管泵入,通過這些導管分布到轉子四周,轉頭內的隔板可保持樣品帶和梯度介質的穩定。沉降的樣品顆粒在區帶轉頭中的沉降情況不同于角式和外擺式轉頭,在徑向的散射離心力作用下,顆粒的沉降距離不變,因此區帶轉頭的“壁效應”極小,可以避免區帶和沉降顆粒的紊亂,分離效果好,而且還有轉速高,容量大,回收梯度容易和不影響分辨率的優點,使超離心用于制備和工業生產成為可能。區帶轉頭的缺點是樣品和介質直接接觸轉頭,耐腐蝕要求高,操作復雜。

    ⑷垂直轉頭:其離心管是垂直放置,樣品顆粒的沉降距離最短,離心所需時間也短,適合用于密度梯度區帶離心,離心結束后液面和樣品區帶要作九十度轉向,因而降速要慢。

    ⑸連續流動轉頭:可用于大量培養液或提取液的濃縮與分離,轉頭與區帶轉頭類似,由轉子桶和有入口和出口的轉頭蓋及附屬裝置組成,離心時樣品液由入口連續流入轉頭,在離心力作用下,懸浮顆粒沉降于轉子桶壁,上清液由出口流出。

    3.離心管:

    離心管主要用塑料和不銹鋼制成,塑料離心管常用材料有聚乙烯(PE),聚碳酸酯(PC),聚丙烯(PP)等,其中PP管性能較好。塑料離心管的優點是透明(或半透明),硬度小,可用穿刺法取出梯度。缺點是易變形,抗有機溶劑腐蝕性差,使用壽命短。

    不銹鋼管強度大,不變形,能抗熱,抗凍,抗化學腐蝕。但用時也應避免接觸強腐蝕性的化學藥品,如強酸、強堿等。

    塑料離心管都有管蓋,離心前管蓋必須蓋嚴,倒置不漏液。管蓋有三種作用:

    ①防止樣品外泄。用于有放射性或強腐蝕性的樣品時,這點尤其重要。②防止樣品揮發。③支持離心管,防止離心管變形。

    4.分析性離心機:

    分析性離心機使用了特殊設計的轉頭和光學檢測系統,以便連續地監視物質在一個離心場中的沉降過程。從而確定其物理性質。

    分析性超速離心機的轉頭是橢圓形的,以避免應力集中于孔處。此轉頭通過一個有柔性的軸聯接到一個高速的驅動裝置上,轉頭在一個冷凍的和真空的腔中旋轉,轉頭上有2~6個裝離心杯的小室,離心杯是扇形石英的,可以上下透光,離心機中裝有一個光學系統,在整個離心期間都能通過紫外吸收或折射率的變化監測離心杯中沉降著的物質,在預定的期間可以拍攝沉降物質的照片,在分析離心杯中物質沉降情況時,在重顆粒和輕顆粒之間形成的界面就像一個折射的透鏡,結果在檢測系統的照像底板上產生了一個“峰”,由于沉降不斷進行,界面向前推進,因此峰也移動,從峰移動的速度可以計算出樣品顆粒的沉降速度。

    分析性超速離心機和主要特點就是能在短時間內,用少量樣品就可以得到一些重要信息,能夠確定生物大分子是否存在,其大致的含量,計算生物大分子的沉降系數,結合界面擴散,估計分子的大小,檢測分子的不均一性及混合物中各組份的比例,測定生物大分子的分子量,還可以檢測生物大分子的構象變化等。

    制備性超速離心的分離方法:

    1.差速沉降離心法:

    這是最普通的離心法。即采用逐漸增加離心速度或低速和高速交替進行離心,使沉降速度不同的顆粒,在不同的離心速度及不同離心時間下分批分離的方法。此法一般用于分離沉降系數相差較大的顆粒。

    差速離心首先要選擇好顆粒沉降所需的離心力和離心時間。當以一定的離心力在一定的離心時間內進行離心時,在離心管底部就會得到最大和最重顆粒的沉淀,分出的上清液在加大轉速下再進行離心,又得到第二部分較大較重顆粒的沉淀及含較小和較輕顆粒的上清液,如此多次離心處理,即能把液體中的不同顆粒較好地分離開。此法所得的沉淀是不均一的,仍雜有其它成分,需經過2~3次的再懸浮和再離心,才能得到較純的顆粒。

    此法主要由于組織勻漿液中分離細胞器和病毒,其優點是:操作簡易,離心后用傾倒法即可將上清液與沉淀分開,并可使用容量較大的角式轉子。缺點是:須多次離心,沉淀中有夾帶,分離效果差,不能一次得到純顆粒,沉淀于管底的顆粒受擠壓,容易變性失活。

    2.密度梯度區帶離心法(簡稱區帶離心法):

    區帶離心法是將樣品加在惰性梯度介質中進行離心沉降或沉降平衡,在一定的離心力下把顆粒分配到梯度中某些特定位置上,形成不同區帶的分離方法。此法的優點是:①分離效果好,可一次獲得較純顆粒;②適應范圍廣,能象差速離心法一樣分離具有沉降系數差的顆粒,又能分離有一定浮力密度差的顆粒;③顆粒不會擠壓變形,能保持顆粒活性,并防止已形成的區帶由于對流而引起混合。

    此法的缺點是:①離心時間較長;②需要制備惰性梯度介質溶液;③操作嚴格,不易掌握。

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