摘 要:目的 建立高速逆流色譜技術分離純化鉤吻素己和1-甲氧基鉤吻堿的方法。方法 采用高速逆流色譜分離技術分離純化鉤吻生物堿單體,以氯仿-甲醇-0.1 mol/ L HCl (4 ∶4 ∶2) 為溶劑體系;高效液相色譜技術分析所提產物的質量分數;核磁共振譜、質譜分析確證單體的化學結構。結果 從300 mg 鉤吻總堿中經過一次高速逆流色譜技術分離純化獲得19.4 mg 鉤吻素己和21.2 mg 1-甲氧基鉤吻堿,質量分數分別為95.4 %、98.6 %;經過電噴霧質譜及核磁共振的結構鑒定分析,證實分離得到的兩種生物堿分別是鉤吻素己和1-甲氧基鉤吻堿。結論 高速逆流色譜技術可高效分離純化鉤吻素己和1-甲氧基鉤吻堿,為鉤吻生物堿的研發提供了制備技術。
鉤吻為馬錢科鉤吻屬植物鉤吻Gelsemium elegans( Gardn1 et Champ1 ) Benth1 全草,盛產于閩、粵、桂等地,具有廣泛的臨床藥用價值,但因其毒性大一直以外用治療為主。鉤吻的主要有效成分為吲哚類生物堿。鉤吻總生物堿具有顯著的抗腫瘤、鎮靜、鎮痛、促進造血、抑制血小板聚集、免疫抑制等作用[1 ,2 ] ,但其有效量與中毒量較為接近,限制了臨床應用。鉤吻素己(圖12A) 為鉤吻生物堿中毒性最強的單體[ 3 ] 。1-甲氧基鉤吻堿(圖12B) 為甲氧基取代鉤吻素甲,其藥理作用未見文獻報道。用于分離純化鉤吻素己和1-甲氧基鉤吻堿的傳統方法為堿性硅膠柱或氧化鋁柱色譜法[3 ] ,但是此方法分離周期長,溶劑消耗大, 得率低。高速逆流色譜( high-
speed counter current chromatograp hy ,HSCCC) 是一種基于液2液分配機制的新型色譜分離純化技術,可避免液固色譜造成的固體載體對樣品的不可逆吸附,分離效率高,回收率高,制備量大[4 ] 。本實驗采用HSCCC 技術分離純化鉤吻素己和1-甲氧基鉤吻堿,旨在為鉤吻生物堿單體的研發提供一種高效分離純化制備技術。
圖1 鉤吻素己( A) 和12甲氧基鉤吻堿( B) 的化學結構
Fig11 Chemical structures of gelsenicine ( A)and gelsevirine ( B)