高速逆流色譜是20世紀80年代發展起來的一種連續的液—液分配色譜分離技術，它不用任何固態的支撐物或載體。儀器利用兩相溶劑體系在高速旋轉的螺旋管內建立起一種特殊的單向性流體動力學平衡，當其中一相作為固定相，另一相作為流動相，在連續洗脫的過程中能保留大量固定相。
今天小編就帶大家了解一下高速逆流色譜的操作步驟。
1.?配液。超聲脫氣約20min，脫氣后靜置冷卻至室溫后泵液。
2.?打開恒溫水浴，將溫度升至設定溫度。
3.?泵固定相。以10～20ml/min流速泵入固定相，檢測器出口端流出固定相約20～50ml后停泵。
4.?平衡。打開紫外檢測器開始預熱，正轉轉動主機至900rpm(FWD為正轉，REV為反轉)，同時以3ml/min流速泵入流動相，至出口端流出流動相且此時紫外信號穩定，體系基本已平衡。
5.進樣。以體系上下相溶解一定量的樣品，超聲溶解均勻后，在裝樣注射器中倒入樣品溶液，將進樣六通閥切換至load，推排氣泡后吸液至樣品全進入進樣圈中，將load切換至inject，檢測器、工作站調零開始記錄。
6.?接收流分。工作站記錄，設備運行時間為500min，保存后采集數據，保存。
7.清洗。斷開泵與主機的連接，將主機進口與氣管出口連接，吹氣；將主機中溶劑吹出后，泵入約50ml清洗液，吹氣，重復此過程2～3次；后一次長時間(1小時左右直至吹干)吹氣時將主機內液體吹盡。
8.關機。
高速逆流色譜相對于傳統的固—液柱色譜技術，具有適用范圍廣、操作靈活、快速、制備量大、費用低等優點。目前廣泛應用于生物醫藥、天然產物、食品和化妝品等領域，特別在天然產物行業中已被認為是一種有效的新型分離技術;適合于中小分子類物質的分離純化。