構造
儀器的中心部分:(a) ITO多層線圈分離柱,它是由100-200米長、內徑為1.6mm左右的聚四氟乙烯管沿具有適當內徑的內軸共繞十多層而成,其管內總體積可達300mL左右。(b)平衡器,它可以調節重量,它的作用是讓(a), (b)相對于中心軸兩邊重量平衡。當在旋轉控制器的控制下,在齒輪傳動裝置作用下,(a),(b)同時繞中心軸作順時針或反時針的行星運動,即(a) -(b)本身既在自轉,但同時又在繞中心軸公轉,公轉轉速可從0-4000r/min。從線圈分離柱中通過中空的中心軸還同時牽引出了線圈的兩端,一端供泵入液用,一端輸出液體。儀器工作需要互不相溶的兩種液體,一相作固定相, 一相作移動相。儀器工作前,先將作為固定相一相的液體通過恒流泵壓入線圈分離柱,然后用進樣器將待分離的樣品進樣,最后用恒流泵壓入移動相,同時啟動中心部分運轉直到轉速大于600r/min。此時,兩相在線圈分離柱中具有相對運動之勢。由于移動相源源不斷的壓入,阻止了固定相的流出,同時,移動相帶著樣品在線圈分離柱中進行無限次的分配而使復雜樣品得到分離。當移動相經過檢測器時,由于不同的樣品組分會產生不同大小的信號,用記錄儀就能得到逆流色譜圖譜,同時用餾分收集器分步收集移動相就會得到復雜樣品被分開的組分。較大的制備型HSCCC,柱容積可達530m1,一次最多進樣可達20g粗品;較小的分析型的HSCCC柱容積為8m1,進樣量為幾十微克,最大轉速可達4000r/min,分析能力堪與HPLC相媲美。
特點
應用范圍廣,適應性好
由于溶劑系統的組成及配比可以是無限多的,因而從理論上講可以適用于任何極性范圍內樣品的分離,在分離天然化合物方面具有其獨到之處。由于聚四氟乙烯管中的固定相為液體不需要固相載體,因而可以消除固-液色譜中由于使用固相載體而帶來的吸附損失,特別適用于分離極性物質。
操作簡便,容易掌握
儀器操作簡單,對樣品的預處理要求低,一般的粗提物即可進行的制備分離或分析。
回收率高
不需要固相載體,消除了由于樣品在固相載體上的不可逆吸附和降解造成的損失,理論上樣品的回收率可達。在實驗中只要調整好分離條件,一般都有很高的回收率。
重現性好
如果樣品不具有較強的表面活性作用,酸堿性也不強,即使多次進樣,其分離過程都保持很穩定,而且重現性相當好。
分離效率高,分離量較大
由于其與一般的色譜分離方式不同,能實現梯度洗脫和反相洗脫,亦能進行重復進樣,使其特別適用于制備性分離,產品純度高,制備量大。