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  • 發布時間:2019-07-29 12:00 原文鏈接: 高GC比模板的PCR擴增

    PCR條件的優化是一個麻煩耗時的過程,涉及到溫度、時間、鎂離子、引物、dNTP、Taq酶、模板等多個因素的調整。一般來說利用熱啟動,比如Platinum Taq DNA聚合酶(Invitrogen)可以達到更高的特異性,降低對鎂離子濃度的依賴,并且有利于提高“問題模板”的產量。然而,傳統的PCR條件優化策略經常對含有穩定二級結構的DNA序列無效,因為這些序列難以變性,并且在退火過程中影響引物與模板的結合,還可能影響到DNA聚合酶的延伸。
    作為一種新的PCR添加成分,PCRx Enhancer Solution(Invitrogen)有助于擴增GC豐富序列,解決由于模板問題而造成的PCR擴增困難。該系統可以提高引物結合的特異性和Taq酶的熱穩定性,并且便于鎂離子濃度和退火溫度的優化選擇。譯者曾經擴增一段GC比70%的序列,可能還有二級結構,用了多個廠家的DNA聚合酶均擴不出條帶,改用Platinum Taq DNA聚合酶后,當PCRx Enhancer Solution添加到濃度為3×時得到了很漂亮的結果。

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