全基因組鳥槍法測序(Whole Genome Shotgun Sequencing)無需構建各類復雜的物理圖譜和遺傳圖譜,采用最經濟有效基因組鳥槍法測序/鳥槍法Shotgun測序(Whole Genome Shotgun Sequencing)無需構建各類復雜的物理圖譜和遺傳圖譜,采用最經濟有效的實驗設計方案,直接將整個基因組打成不同大小的DNA片段構建Shotgun文庫,對文庫進行隨機測序,最后運用生物信息學方法將測序片段拼接成全基因組序列。
全基因組鳥槍法測序的主要步驟是:第一,建立高度隨機、插入片段大小為1.6kb到4kb左右的基因組文庫。克隆數要達到一定數量,即經過兩端測序的克隆片段的堿基總數應達到基因組大小的6到10倍。第二,高效、大規模的克隆雙向測序。第三,序列組裝。借助Phred, Phrap, Consed 軟件進行序列組裝,產生一定數量的contig。第四,填補缺口。有兩種待填補的缺口,一是沒有相應模板DNA的物理缺口,我們通過PCR的方法進行填補;二是有模板DNA但未測到的序列缺口,我們直接在模板DNA上設計引物測序。
鳥槍法測序適用范圍:BAC、Fosmid、cosmid、線粒體DNA、葉綠體DNA等。
全基因組鳥槍法測序的主要步驟是:第一,建立高度隨機、插入片段大小為1.6kb到4kb左右的基因組文庫。克隆數要達到一定數量,即經過兩端測序的克隆片段的堿基總數應達到基因組大小的6到10倍。第二,高效、大規模的克隆雙向測序。第三,序列組裝。借助Phred, Phrap, Consed 軟件進行序列組裝,產生一定數量的contig。第四,填補缺口。有兩種待填補的缺口,一是沒有相應模板DNA的物理缺口,通過PCR的方法進行填補;二是有模板DNA但未測到的序列缺口,直接在模板DNA上設計引物測序。
1999年,Yates研究組提出“鳥槍法”(shotgun),其基本技術路線是針對液體或SDS-PAGE條帶的復雜混合物用酶(Trypsin)酶解成肽段混合物,然后對肽混合物進行多維毛細管液相色譜分離......
【摘要】鳥槍法串聯質譜蛋白質鑒定策略由于其高可靠和高效率而被廣泛應用于蛋白質組學研究中,這種方法直接對蛋白質混合物進行酶切,以肽段為鑒定單元,繼而推導真實的樣品蛋白質。由于利用質譜圖推導肽段存在一定的......
摘要蛋白質定量是探索疾病發生發展狀況和尋找新藥靶標的重要手段。在shotgun蛋白組學中,目前常用定量方法包括綜合同位素標記后的質譜峰強度方法和無標記定量方法。根據數據類型無標記定量方法可以分為兩類:......
摘要細胞質膜是細胞中重要的細胞器,在肝功能的發揮中具有非常重要的作用.使用蔗糖密度梯度離心純化細胞質膜,通過電子顯微鏡觀察和免疫印跡法檢驗膜的純度.結果顯示,與組織勻漿成分相比,質膜富集了20倍,線粒......