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1. 如前所述（見方案 12.2 ) 取出胚胎（孵化10~13天的受精卵（>10天在英國需要許可證）），放入無菌的 BSS 中。
2. 除去頭部。
3. 切除眼球，小心剖開后清除晶狀體、房水、玻璃體。
4.
用兩把尖鑷子夾住視網膜，輕輕將色素層與神經層及結締組織分開 （10 天的胚胎需要用解剖鏡。用 0.25% 胰蛋白酶（0.25
粗制胰蛋白酶（Difco 1 : 250 或同等級別的產品），以 RPMI1640 或 S-MEM
配制，置于冰上。如果用純的胰蛋白酶，濃度可降低，如 Sigma 的“結晶級”或 Worthington 的“IV級”可配成 0.05%~0.1%
的濃度）及 1 mmol/L 的 EDTA 溶液短暫浸泡可促使兩組織易于分離）。將分離的組織放于一側。
5. 用彎鑷子刺破顱頂，用勺取出腦，將腦、視網膜一起放于皿的一側。
6. 從軀干的中間斷開（此處肝透過腹壁顯出粉紅色），若切在膈的位置則將從心臟和肝臟之間通過，但有時肝臟會出現在前半部而不是后半部。
7. 輕輕探入切面的前半部，取出心臟和肺（挑出器官，確認后再切），把分離后的心臟和肺放于皿中的一側。
8. 探入后半部，取出肝臟，由于腸夾于肝臟的兩葉之間可一并取出，分離肝和腸放于皿的一側。
9. 折回體壁后半體腔背側面的內壁，可見長的分葉狀的腎并行排列于中線兩側。
10. 用刀尖輕輕地滑至腎的背面，使腎自軀體背面內側壁剝離（10 天的胚胎需要用解剖鏡），將腎分離下來后放于一側。
11. 將兩把手術刀置于后部未端的中線上，尖端向前，交替前進像擠牙膏一樣將脊髄擠出。
12. 將胚胎后部軀干翻轉，將皮膚自背部和腿上部撕脫，收集皮膚放于一側。
13. 自每條腿的股部切下肌肉，收集到一起。
14. 將所有這些收集的組織以及其他所蓋要的任何組織分別轉入含 1 ml 0.25% 胰蛋白酶的試管中，放于冰上，確認組織塊已沉入胰蛋白酶溶液中。
15. 于 4°C 放置 6~18 h 。
16. 小心吸去胰蛋白酶，不要攪動組織塊；振動或慢慢旋轉試管將有助于消化。
17. 組織塊在剩余的胰蛋白酶中 37°C 孵育 15~20 min。
18. 每種組織接種兩個 25 cm2 培養瓶，每個培養瓶加 4 ml 的培養基。
19. 向含組織和剩余胰蛋白酶的試管中加入 2 ml 培養基，輕輕上下吸打分散組織。
20. 讓大塊組織沉淀。
21. 將上清吸入第一個培養瓶中，混勻，將 1 ml 稀釋的懸液移入第 2 個培養瓶。這樣做使得兩瓶的細胞密度不同，可免去細胞計數，而試驗可確定細胞的適宜濃度，用于以后的實驗。
22. 按需要更換培養基（如腦于 24 h 后更換；視網膜色素層則大約保持 5~7 天），并檢測形態學特點和功能。
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