HPLC具有高分辨率，分析時間較短等優點。它的原理是樣品溶液中欲分離的幾種化合物在流動相和固定相之間有不同的分配量，從而達到分離的目的。AF經柱后電化學衍生化后，能發射特征性熒光，被熒光檢測器捕獲后而得到檢測，最后經化學工作站處理數據。這一檢測方法，將化學分析試驗與領先的計算機技術結合，使自動化程度得到極大的提高，在試驗空間、人力和儀器都保持不變的情況下，能檢測更多的樣品。HPLC是近幾年發展起來的檢測AFB1的方法，主要是用熒光檢測器檢測。該法快速而準確，但需要昂貴的儀器設備，未能廣泛使用。
