（HicN）法血紅蛋白測定實驗

Hb被高鐵氰化鉀氧化成高鐵血紅蛋白(Hi)，再與氰離子(CN)結合，生成穩定的氰化高鐵血紅蛋白(HiCN)。HiCN最大吸收峰在540 nm處，在特定條件下毫摩爾吸光系數為44 000(mmol·cm)，根據吸光度即可求出血紅蛋白濃度(g／L)。

血液樣品

Prabkin試劑文齊試劑馬其改良試劑HiCN轉化液

分光光度計注射器

一、實驗、試劑：

l、都氏（Prabkin）試劑

碳酸氫鈉1.0g，氰化鉀0.05g鐵氰化鉀0.20g

蒸餾水1000mL該試劑PH值達8.5與血紅蛋白作用較慢，故試劑與血混合后一般放置20min才能比色，此試劑易發生混濁，近年來己不采用．2、文齊（Van KamPen和zilstra）試劑

氰化鉀0.05g鐵氰化鉀0.2g非離子表面活性劑0.5－lml，磷酸二氫鉀0.14g蒸餾水1000mL，糾正PH值至7.0-7.4．3、馬其（Matsabara）改良試劑在文齊試劑內加NaCl5.0g或50g（常用改良試劑）（加強改良試劑）常用改良試劑可稍除由異常球蛋白所引起的混濁，加強改良試劑可消除由白細胞顯著增加所引起的混濁．

二、實驗操作方法：

l、取指血或V血20ul，加到5mL血紅蛋白轉化液中，混勻，靜止5分鐘，2、用分光光度計比色，波長540nm，以蒸餾水或空白轉化液調零，測定吸光度。

3、如果使用符合WHO標推的分光光度計，則可根據測定吸光度 A 直接計算出紅蛋白的濃度，Hb(g/L)=（Aλ540/44）x（64458/1000）x251=Ax367.7，其中 Aλ540／HicN為測定管吸光度。64458為 Hb分子量，64458/l000為10mmoL／LHb 溶液中含Hb克數，251為血液稀釋倍數，Hb曲線求R值，定值，50g／L  100g／L  150g／L和 200g／LHicN考液在 721型分光光度計上固定吸光度 A 分別為 0.13，0.27，0.405，0.54

氰化高鐵血紅蛋白標準曲線或按下式求出吸光度血紅蛋白換算常數（Ｋ值）K=qHb(g/L)qA=(50+100+150+200)/(0.13+0.27+0.405+0.54)=371.75五、計算：血紅蛋白（g／L）＝測定管吸光度x367.7參考值：成年男性：120-160g／L

成年女性：110－150g／L

初生兒：　170－220g／L

本法試劑中KCN有劇毒，測定過程中高白細胞和高球蛋白血癥易致混濁，HbCO轉化較慢。

來源《檢驗操作技術與林川應用簡明手冊》、《檢驗醫學與臨床》。