取出生1-2d的乳鼠,用麻醉劑處死。在D-hanks液中取大腦并分離海馬組織,胰蛋白酶消化,獲得細胞懸液,胎盤藍染色進行死活細胞記數,將細胞以5×105/ml的密度接種于預先經L-多聚賴氨酸處理的96孔和24孔培養板,其中24孔板中預先放置有蓋玻片。細胞維持在培養液中,置入5%CO2,飽和濕度的培養箱中培養,24h后全換液,接種當天為第一天,每3d半量更換培養液一次,培養第3天時加入阿糖胞苷,終濃度為10μmol/L,以抑制神經膠質細胞的過度增殖,24h后更換全部培養液繼續培養,第10天進行細胞造模,開始實驗。
也可以用PC12細胞株,常規培養
Aβ產物誘導海馬神經細胞,建立細胞模型:
選擇Aβ25-35片段,用三蒸水配制成100μmol?L-1,過濾,分裝,-20℃凍存;使用前老化處理并配制成所需濃度。(將Aβ25-35溶解在DMSO中,在用DMEM稀釋,置于37℃下孵育7-14天,即為老化狀態)。
細胞模型建立:加入濃度為20μmol/L的Aβ25-35,接觸24h,誘導建立AD細胞模型.
檢測指標:MTT LDH 凋亡 細胞內鈣離子 以及SOD等