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  • 發布時間:2019-07-07 12:55 原文鏈接: 125I標記單克隆抗體技術

    同位素標記是一種重要的抗體標記技術,牨977年Yalow等在放射免疫測定法所作突出貢獻而獲得醫學和生理學諾貝爾獎。McAb標記同位素后除應用于放射免疫測定外,還可用于競爭結合試驗、體內腫瘤定位等。

      (一) 原理

      氯胺桾即對甲苯碘氯胺鈉,在水溶液中生成次氯酸,為一種溫和氧化劑,當加入到有蛋白質和碘的弱堿水溶液中,可將I2氧化為I+并結合到氨基酸上。如標記條件溫和,標記后的McAb仍具有良好的結合活性,通過放射性同位素強度的測定可反映相應抗原的含量。

      (二) 方法

          在細胞凍存管內加入純化的McAb100μg/100μl,
          再加入10μl 0.05M磷酸緩沖液
          再加入10μl(含1mCi)125I

              ↓

          加入10μl氯胺-T(5mg/ml溶于0.05M
          磷酸鹽緩沖液),孵育時間不超過30秒

                 ↓

          加入100μl偏重亞硫酸鈉(1.2mg/ml溶于
          0.05M磷酸緩沖液)

                 ↓

          加入200μl KI溶液(少許結晶KI溶于0.05M
          磷酸緩沖液+4%牛血清白蛋白)

                 ↓

          用PD10柱(Sephadex G25)除去游離125I
          用4%BSA PBS洗脫

                 ↓

          分部收集,0.5ml/管

      每管取5μl進行γ計數,計算標記抗體的比活性和標記率

               結合于McAb125I放射性強度(cpm)
        標記率(%)=───────────────────
                  總放射性強度(cpm)

                    結合于某一管McAb上的放射性強度
        比活性(μCi/μgMcAb)=────────────────
                        某一管McAb總量

      (三) 試劑器材

      1. 純化后的McAb

      2. 0.05M磷酸緩沖液,氯胺桾,偏重亞硫酸鈉,KI,BSA

      3. 125I

      4. 有通風裝置的超凈臺,γ計數儀

      5. PD10柱(Sephadex G25)

      (四) 注意事項

      1. 嚴防同位素污染,工作人員必須穿著工作衣,戴口罩、帽子、手套。必須在嚴密的通風櫥或通風超凈臺中操作。操作前后對實驗室環境進行監測。所用125I和標記物應妥善保管。

      2. 如標記細胞因子、激素等,應選用更溫和的標記方法,使保持更好的生物學活性。


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