中藥材在種植、采收、運輸和貯藏的過程中,容易引起大量真菌生長和毒素累積,真菌會代謝產生次級代謝產物:真菌毒素(mycotoxin),真菌毒素通常以痕量形式存在于基質中, 長期攝入易引發癌癥、突變及畸形。中藥霉變已成為影響中藥材質量與使用安全的主要問題之一。
2020版藥典第四部2351真菌毒素測定法,較2015版新增了玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、展青霉毒、多毒素真菌毒素測定法。針對檢測方法新變化,經仔細研讀并歸納出各毒素檢測步驟簡化版,供各位參考!
| 毒素 | 檢測方法 | 前處理方法 | |||||||
| 稱樣量 | 提取液 | 稀釋 | 過柱體積 | 洗脫溶劑體積 | 0.22μm濾膜過濾 | 是否氮吹 | |||
| 黃曲霉毒素 | 液相 IAC | 15g+3g氯化鈉 | 70% 甲醇75mL |
15mL上清定容至50mL | 20mL | 2mL甲醇 | 是 | 否 | |
| 液質 | 同液相法 | ||||||||
| 赭曲霉毒素 | 液相 IAC | 20g+4g氯化鈉 | 80% 甲醇100mL |
10mL上清定容至50mL | 10mL | 2mL甲醇 | 是 | 否 | |
| 液質 | 同液相法 | ||||||||
| 玉米赤霉烯酮 | 液相 IAC | 20g+4g氯化鈉 | 90% 乙腈100mL |
10mL上清定容至50mL | 20mL | 2mL甲醇 | 是 | 否 | |
| 液質 | 同液相法 | ||||||||
| 嘔吐毒素 | 液相 IAC | 20g+5g聚乙二醇8000 | 純水100mL | 無 | 5mL | 1mL甲醇洗脫用水定容至2mL | 是 | 否 | |
| 液質 | 同液相法 | ||||||||
| 展青霉素 | 液質 固相凈化柱 |
4g+20mL水+75uL果膠酶,40℃下放2h,加乙腈60mL。上清20mL加無水硫酸鎂:無水醋酸鈉(4:1)混合粉末3g。上清8mL,過展青凈化柱,凈化液混勻取5mL,40℃氮吹至近干,加2%乙腈溶液(醋酸調PH至2)定容至0.5mL,用微孔濾膜(0.22μm)濾過,取續濾液,既得。 | |||||||
| 多毒素* | 液質 HLB柱 【規格3mL(60mg)依次用甲醇和水各3mL洗脫】 |
5g+70%甲醇50mL超聲30min。上清10mL+水稀釋至20mL。取3mL通過已處理好的HLB柱,收集洗脫液,用3mL甲醇洗脫收集洗脫液,合并兩次洗脫液,40℃氮氣吹至近干,50%乙腈溶液定容至1mL用微孔濾膜(0.22μm)濾過,取續濾液,既得。 | |||||||
*:黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2、赭曲霉毒素A、嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮、伏馬毒素B1、B2及T-2毒素。