首先考慮是不是消化過度的問題，我們用的是0.1％的胰酶消化的，每次的時間都是6分鐘左右（消化幾次后，組織物少時會縮短時間），以前實驗室做的時候也沒有問題，后來改用0.08％的胰酶還是不行，又考慮是不是血清，我們用的是Hyclone特級胎牛血清，南美血緣的，考慮是不是不如北美血緣的好，又把實驗室各種血清試了一遍，結果還是不好，又檢查了CO2溫箱的溫度和濕度是不是穩定。我們把能換的東西都換了一遍，血清，胰酶濃度，培養板，CO2氣，最終我們請教了另外的做心肌細胞培養的人，換用胰酶＋膠原酶II混合消化的方法，并且每次消化前都輕柔的吹打讓組織充分和消化液混合，消化后也充分吹打后靜置1－2分鐘再吸上清，最后離心完成后，用培養基重懸沉淀是要充分吹打，以避免再下一步過濾時大量的丟失細胞。還要保證種板的密度，一般24孔板我們用2.5×105，每孔1ml，這樣24h后就可以很漂亮的看到細胞搏動了，一般72h后搏動就是統一的頻率了。
總結來說：
1.0.08％膠原酶II＋0.125%胰酶等比混合后消化
2.消化前后一定要輕柔吹打
3.重懸時要充分吹打，動作輕柔（100次）
4.種板密度要合適
5.當然血清，板都要進口，別圖便宜
6.別忘了檢查CO2溫箱的情況