實驗概要
3H胸腺嘧啶核苷(3Hthymidine，3HTdR)摻入試驗，是體外淋巴細胞轉化試驗較客觀、重復性好、結果準確的方法之一。
實驗原理
當淋巴細胞受分裂原(PHA等)或特異性抗原刺激發生轉化時，必然伴有DNA的大量合成，若將具有放射性的3HTdR加到培養液內，則可被作為合成DNA的原料而攝入轉化中的細胞內，測定細胞內放射性物質的相對數量(以脈沖數表示)，就能客觀地反映淋巴細胞對刺激物的應答水平。
3HTdR摻入法最初是利用分離純的淋巴細胞進行試驗，近年來逐漸推廣采用微量全血法，該法具有采樣少，操作簡便，并能較正確地反映整個機體免疫狀態等優點。
主要試劑
1. 培養基RPMI1640或TC199培養液。
2. 小牛血清50℃ 30min滅活后使用。
3. PHA同形態學方法。
4. 3HTdR最好選用比活性為2～10mol/mg分子的制品，將1mci/ml溶液用生理鹽水稀釋為100μol/ml，于4℃冰箱保存，臨用時，再用培養液稀釋成10μol/ml溶液。
5. 3%冰醋酸。
6. 濃甲酸。
7. 30%H2O2。
8. 閃爍液PPO(2,5二苯基口惡唑)5g，POPOP〔1,4雙(5苯基口惡唑基2苯)〕0.3g，無水乙醇200ml，甲苯800ml。
主要設備
國產FJ353型或YSJ76型液體閃爍計數器，恒溫箱，水浴箱，離心機，培養瓶(10ml鏈霉素瓶)，其他常用器材。
實驗步驟
1. 培養液按1%體積加青、鏈霉素溶液(含青霉素1萬u/ml、鏈霉素0.01g/ml)及肝素液(含肝素125u/ml)。用35%碳酸氫鈉溶液調整pH值為7.2～7.4，然后加滅活小牛血清使濃度為20%。再加所需要的PHA，無菌分裝于培養瓶內，每瓶1ml。
2. 無菌取靜脈血0.5～1.5ml，按每毫升血加入肝素125u抗凝，進行白細胞計數及分類。
3. 將肝素抗凝血液樣品注入含1ml培養液的培養瓶內，每瓶0.1ml，每份樣品2～3管，37℃培養72h。在培養結束前16～24h，每瓶加入3HTdR 1μol。
4. 培養結束后，將培養物移到離心管內，用3%冰醋酸6ml分兩次沖洗培養瓶，并將沖洗液也放入離心管內，2000 r/min離心10min，如此反復兩次。
5. 最后在沉淀中加30% H2O2 1滴，85℃水浴加溫15min，待溶液呈無色，再加濃甲酸0.5ml后，繼續加熱30min，使沉淀物完全消化溶解。
6. 將消化溶解的液體移于測樣杯內，用紅外線燈或80℃熱空氣烘烤至液體體積少于0.1ml，加閃爍液5ml，用液體閃爍計數器測定每分鐘脈沖數(cpm)。
7. 取各管測定讀數的平均值，即為0.1ml全血檢測的脈沖數。再按血樣淋巴細胞計數結果，校正成每百萬淋巴細胞的脈沖數(cpm/106淋巴細胞)。
亦可用刺激指數(SI)表示試驗結果。為此，須在培養時設同樣數量的不加PHA的對照管，試驗管脈沖數之比即為刺激指數。SI=加PHA管cpm不加PHA管cpm。
注意事項
1. 培養基TC199或RPMI1640培養基都能得到良好結果，Eagle MEM亦較常用，其他許多種組織培養基，包括05%水解乳蛋白、Hanks液也都可用于實驗，但做實驗動物淋轉試驗時，特別是檢測小鼠淋巴細胞轉化率時，則以RPMI1640培養基效果最好，Eagle MEM亦可，TC199則不成功。
2. 其他培養條件血樣與培養基比例在1∶10至1∶30之間。培養容器國外多用螺紋口蓋的培養管或微型培養板，置5%CO2氣體環境中培養。國內采用10ml容量的鏈霉素瓶，塞上膠塞放普通氣體環境中培養，有時發現同一樣品在不同管培養物上所得的結果差別較大，其原因可能是各管膠塞松緊不一，造成管內、外氣體交流情況不同所致。
3. 閃爍樣品制備有關問題培養后制備閃爍測定樣品的方法大體有均相法(或稱溶解法)和濾膜法兩類。
1) 均相法：是使培養物經過紅細胞溶解，洗脫未被攝入的放射性物，沉淀大分子物質，并使之消化溶解，便于均勻分布在閃爍液中。上述方法即為均相法的一種。不同實驗室的具體操作法和應用的試劑常有不同，溶解紅細胞多用1%～3%醋酸，但也有使用蒸餾水。許多實驗室多用5～10%三氯醋酸(TCA)沉淀大分子物質，使洗液不致流失，消化溶解，最后沉淀物多采用強酸和氫氧化鈉。
2) 濾膜法：均相法處理樣品須反復多次離心沉淀，操作繁瑣，耗費時間，因此有逐漸被濾膜法取代的趨勢。
濾膜有玻璃纖維和微孔濾膜兩種，直徑2～25cm，孔徑0.3～0.45μm。處理方法是先使培養物的紅細胞溶解(加3%醋酸或蒸餾水)，移于濾膜上減壓抽濾，再依次使約10ml生理鹽水、5～10ml的5%～10%三氯醋酸溶液、3～5ml無水乙醇通過濾膜，最后將濾膜移于測樣杯內，加5ml閃爍液測定。
3) 閃爍液：30%三聯苯甲苯溶液或4%～5%PPO甲苯溶液均可使用。如添加0.1%～0.4%POPOP提高測定效率。閃爍溶劑中加入一定比例的醇類(如無水乙醇)，則可容納處理后樣品中可能殘留的水分，但閃爍液的溶水量仍然很低，故須將樣品烘干或接近干燥后再加閃爍液，否則將發生混濁而無法測定。若閃爍液內含1/3體積的異辛基苯氧聚乙氧乙醇( TritonX100)，其容水量可達15%，消化溶解后的樣品不必烤干，即可添加閃爍液測定。
4) 對照問題：由于絕大多數樣品的對照(即不加PHA培養后的檢測結果)，其cpm與本底比較接近，不同樣品之間的少許差別也不易確定其意義，故依據刺激指數以表示轉化水平(刺激指數一般在100左右)，不如直接用cpm的絕對值表示更明確可靠，因此，可以省略對照，而用樣品單位體積(以上為0.1ml全血)cpm/106淋巴細胞表示結果。
實驗動物，特別是小鼠的淋轉試驗結果，通常須用刺激指數表示，但因為在正常動物不同個體之間，不論是加PHA培養管或不加PHA培養的對照管，cpm差別較大，有時可達10倍左右，試驗時必須設相同數量的對照培養管，測定后計算刺激指數，才能比較正確地反映機體的免疫應答水平。