(以篩選抗空腸彎曲菌共同抗原的單克隆抗體為例)
1 材料
(1) 空腸彎曲菌共同抗原提取物，自制。
(2) 生物素化羊抗鼠IgG(AMG)，衛生部上海生物制品所。
(3) ABC試劑，衛生部上海生物制品所。如ABC試劑需自己配制，可按說明要求，將親和素與酶標生物素按一定比例混合，置37℃孵育30min后使用。
(4) 被檢雜交瘤培養物上清液。
(5) 其他試劑及器材同常規ELISA法。
2 方法ABCELISA間接法程序
(1) 用包被液對空腸彎曲菌共同抗原提取物作適當稀釋(1∶16)，加入反應孔中，每孔01ml，置4℃包被過夜或37℃1～2h。
(2) 用洗滌液洗滌2次，每次1min，瀝干。
(3) 加入雜交瘤培養物上清液，每孔01ml。同時作BALB/C小鼠免疫血清(陽性)及正常血清和培養液(陰性)對照，置37℃1～2h。
(4) 洗滌3次，方法同上。
(5) 用保溫液對生物素化羊抗鼠IgG作適當稀釋(1∶400～1∶1000)，加入反應孔中，每孔01ml。置37℃孵育1h。
(6) 洗滌3次，方法同上。
(7) 用ABC稀釋液或保溫液對ABC試劑作適當稀釋(1∶100)，加入反應孔中，每孔01ml。置37℃孵育30min。
(8) 洗滌3次，方法同上。
(9) 加入鄰苯二胺底物溶液，每孔01ml，置暗盒內室溫顯色適當時間(30min)。
(10) 加入2mol/L H2SO4，每孔005ml，終止反應。用酶聯檢測儀檢測結果，并記錄其OD值。
3 結果判定以P/N≥2為陽性，或根據自定標準判定。
4 注意事項
1 ABCELISA中各要素的最佳反應條件需經篩選后確定，不能照搬常規ELISA的反應條件。
2 ABCELISA對抗原和抗體(或免疫血清)的質量要求高，否則可造成較高的本底或背景顯色。