AlphaLISA在生物檢測中的應用

AlphaLISA技術是基于增強的化學發光的一種均相免疫檢測，操作簡單,避免了繁瑣的洗滌步驟，是免疫檢測和藥物篩選的理想選擇。

AlphaLISA檢測生物分子原理。

AlphaLISA方法檢測Amyloid β1-40結果。

AlphaLISA技術是基于增強的化學發光的一種均相免疫檢測，跟傳統的需要洗滌的ELISA檢測相比具有很大的優勢。

ELISA技術靈敏、特異，應用多樣，因此被廣泛采用。但其通常包含多次洗滌步驟，操作復雜，動態范圍較窄，而且對抗體親和力要求較高，這些缺點都限制了ELISA的應用，尤其是在進行生物標志物檢測和藥物篩選時。AlphaLISA利用作為供體和受體的微珠來進行生物分子的檢測。如果樣品中存在檢測目標，供體微珠和受體微珠會由于抗體的特異性識別而相互接近，從而激發受體微珠上級聯放大的化學發光反應，最后將信號傳遞到銪上，產生信號。具體來說，在680nm的激光照射下，供體微珠上的光敏劑將周圍環境中的氧氣轉化為更為活躍的單體氧，該反應每秒鐘可產生60 000個單體氧分子。單體氧在溶液中可擴散200nm，當它擴散到受體微珠時，與其上的化學發光劑發生化學反應，從而激發了一連串的化學發光反應，最后將能量傳遞到銪上，在615nm產生信號。

AlphaLISA 是均相技術，避免了繁瑣的洗滌步驟，操作簡單；其長波長激發，短波長發射，背景很低；作為能量傳遞中間體的單體氧，每秒鐘可產生60 000個，信號強；微珠直徑250nm，卻可結合200~300個抗體，可進行低親和力生物分子的檢測；信號傳遞到銪，檢測波長為615nm，抗干擾能力強。所以，用AlphaLISA進行免疫檢測，靈敏度可達10 amol，線性范圍為3~5個數量級，可進行生理狀態下生物樣品的檢測，尤其是血液樣品，并且可以采用低親和力的抗體進行實驗。到現在為止，很多跨國制藥公司，如葛蘭素史克、諾華、諾和諾德等都采用了AlphaLISA進行免疫檢測和藥物篩選。

采用AlphaLISA技術，整個實驗過程只需要簡單的三步：1. 加入樣品；2. 加入與抗體偶聯的受體微珠和生物素化的抗體，孵育；3. 加入與生物素偶聯的供體微珠，孵育。隨后就可以用儀器預設的程序進行檢測了。以Amyloid β1-40檢測為例，葛蘭素史克公司將AlphaLISA技術與另一較靈敏的電化學技術進行了比較，發現AlphaLISA可進行冷凍樣品的檢測，在保證更好效果的前提下，時間減少了1/4，花費降低了80%，并且標準差由28.91降低為10.34，假陽性率也大大減少。該方法檢測Amyloid β1-40（試劑盒），最低檢測限為88pg/ml，線性范圍為88 ~100 000 pg/ml。

PerkinElmer公司能夠為AlphaLISA檢測提供從樣品/分析準備到檢測、數據分析的全方位的產品和技術支持，包括：AlphaLISA檢測試劑盒（包括VEGF、Amyloid β1-40、Amyloid β1-42、Insulin、Human IgG、 EPO、 HIV p24、 TNFα等等）、各種規格的OptiPlates/AlphaPlates檢測板、帶Alpha模塊的Envision檢測儀以及JANUS/FlexDrop AlphaLISA工作站等。更為重要的是，PerkinElmer公司多年來一直投入大量人力物力針對AlphaLISA技術進行產品研發和應用開發，并與各大跨國制藥公司研發中心建立了穩固深入的合作交流聯系。