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  • 發布時間:2020-08-17 09:01 原文鏈接: Azurebiosystems如何選擇合適的westernBlot成像方法

      如何選擇合適的western Blot成像方法

      最合適的Western blot實驗方法取決于您期望獲得哪些信息,以下內容將幫助您選擇最佳實驗方法。

      化學發光方法

      化學發光western blot是相對容易且靈敏度極高的檢測方法,靈敏度可以達到fg級。

      分子量差異顯著的蛋白,通過電泳可輕松分離,使用“化學發光”檢測非常方便。

      優勢:

      劣勢:

      靈敏度高

      容易,實驗方案熟悉

      兼容膠片和數字成像

      半定量分析

      酶促反應

      僅能進行單一信號采集,上樣量控制需要剝離和二次孵育

      蛋白凝膠電泳:

      檢測單一蛋白

      確定蛋白有無

      檢測抗體反應

      蛋白純度分析

      檢測低豐度蛋白

      化學發光,單信號,單蛋白

      熒光方法

      熒光Western blot使用熒光染料標記的二抗進行檢測,印跡膜上的靶標蛋白濃度與熒光信號強度呈線性關系,實現真實可靠的定量分析。熒光染料發射光譜不同,因此在一張 印跡膜上可實現多重檢測。在無需剝離和二次孵育條件下,進行上樣量質控,分析翻譯后修飾蛋白時尤為適用。

      熒光western blot使用 紅外或者可見熒光染料.

      優勢:

      劣勢:

      可進行多重檢測

      定量精準度高

      熒光近紅外印跡膜可儲存,并可重復成像

      靈敏度略低于化學發光方法

      膜自發熒光導致背景噪音增加

      可見熒光檢測的優勢

      當需要同時檢測三個蛋白時,可見熒光顯然是最佳的選擇。可見熒光具備很好的靈活性,有多種可見熒光染料可供選擇。如果您正在使用可見熒光染料(發射光譜可被區分)進行 其它實驗,很容易將這些染料應用于Western blot實驗中。

      熒光檢測方法,可用于:

      同時檢測多種蛋白

      研究翻譯后修飾蛋白

      同一印跡膜的上樣量質控

      多個泳道歸一化

      精確定量 Western實驗

      多重熒光,多種蛋白

      上海潔誠生物科技有限公司 http://www.jc-equip.com/


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