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  • 發布時間:2021-05-15 11:23 原文鏈接: B群鏈球菌CAMP試驗之奇趣現象

     B群鏈球菌(GBS)可以導致孕產婦泌尿系統感染、羊膜絨毛膜炎、敗血癥和早產;產婦分娩時GBS可經產道傳染給新生兒,主要引起新生兒肺炎、敗血癥和腦膜炎,新生兒感染時病情常較嚴重、預后差。因此檢測GBS篩查是醫院微生物室老師必須掌握的技術之一,實際工作中,我們常用CAMP試驗來篩查GBS,讓我來和大家聊聊我在實際試驗過程中遇到的一些有趣現象吧。

        首先回顧下基本原理和操作方法:GBS能產生一種較為特殊的蛋白質,我們稱之為CAMP因子,它能增強金黃色葡萄球菌β溶血毒素的溶血活性,在血平板上在兩菌的交界處出現矢狀(箭頭形)的加強溶血區。方法:將指示菌在血平板上劃橫線接種,再將可疑為GBS的試驗菌垂直劃線接種,兩者相距3-4mm,孵育24小時查看結果,陽性結果如圖2:

        有一次,我連續觀察CAMP試驗,如圖3為孵育48小時形態,24h時箭頭沒有那么大,箭頭后面那根溶血線如圖中所標示(圖片忘記拍了)。當時我想:24h和48h時溶血線如此平行意味著什么呢?那根溶血線是否是金葡菌β溶血毒素的擴散線?

        于是我想了個辦法,又做了一次試驗。我故意在接種時將金葡菌劃彎,而GBS在劃線時依然保持豎直。發現金葡菌接種劃線和箭頭后面的那根溶血線果然走勢一致,如圖4。看來我的猜測雖然沒有經過嚴密的金葡菌β溶血毒素檢測證實,但是后面那根溶血線應該和金葡菌的β溶血毒素的擴散密切相關了!

        可是發現了上述現象又有什么用呢?平時工作中,各位老師們有沒有遇到比較奇怪的溶血現象呢,我是有遇到幾次但是忘記拍下來了,不過我用GBS和ATCC25923模擬了這一現象,老師們看圖5吧

        這樣的溶血環是不是很熟悉呢,圖5中點種了9個金葡菌,其它的則是在金葡菌周圍不同距離點種的GBS,形成了不同的溶血圖案!這這塊平板上,您能迅速指出哪些是金葡菌嗎?也有剛進入微生物室的老師經常會問,這是什么溶血現象呢,不是圓形的溶血環還這么奇形怪狀,會是什么菌?這時就可以用到前面圖3中推測的規律了,金葡菌β溶血毒素在劃線接種時擴散的最遠處是一條平行線,那么在點種時它的擴散區域應該就是一個圓形了,遇上GBS的CAMP因子就顯示出透明的圓形溶血線,也就是說圓弧溶血線中心位置的就是金葡菌了!完全正確!金葡菌點種位置見圖6。在日常工作中,我們只要按照這個方法就能迅速的找到金葡菌的位置,當然也有可能是其它葡萄球菌了,在它周邊的可能就是無乳了,不過也可以用觸酶試驗來區分,可能您要多費一些功夫了。

        問題結束了嗎?沒有。我常常在想:為什么不同菌的CAMP試驗會出現不同的圖形呢?如圖7中所示區域,按理說金葡菌的β溶血毒素擴散區域應該是一個長方形區域的,越靠近菌落濃度應該越高,GBS的CAMP因子也應當是如此。為什么圖中顯示的區域沒有溶血?我沒有找到合理的解釋,只是心中有一個猜測:是否只有CAMP因子和金葡菌的β溶血毒素在濃度比例合適時才出現溶血?過高或過低都不能出現協同現象?不同屬的細菌產生的CAMP因子的濃度不一樣,只有和金葡菌的β溶血毒素達到一定比例處才出現加強溶血?于是出現了不同的圖形。雖然這個問題可能不能帶來實際比較有意義的應用,但是我就是個好奇的人!


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