【試劑及配制】
（1） 包被液（pH 9.6 碳酸鹽緩沖液）
a2CO3 0.16g
aHCO3 0.29g
蒸餾水加至 100ml
（2） 洗滌液（pH 7.4 -Tween 20）
KH2PO4 0.2g
Na2HPO4·12H20 2.9g
NaCl 8.0g
KCl 0.2g
Tween 20 0.5ml
蒸餾水加至 1000ml
（3） 封閉液（1%A pH 9.6 碳酸鹽緩沖液）
（4） 抗原
（5） BiO-Ab和Avi-HRP
【操作方法】
（1） 培養板的預處理：在24培養板孔內加0.5ml0.2%戊二醛（溶于0.1mol/L ，pH5.0 ），37℃，4h，甩去板中的處理液，洗滌3次，每次3min；
（2） 抗原包被：將適量抗原溶于包被緩沖液中，每孔加入0.5ml，4℃過夜，-T洗滌3次，每次3min；
（3）
制備細胞懸液：將待測已致敏小鼠處死，取出脾臟，置于加有Hanks液的小平皿內，用鈍頭直角9號注射器針頭破少許脾被膜后，趕出細胞，用毛細吸管輕輕吹散細胞團后，將懸液通過250目尼龍網，取濾液，1000r/min離心5min，Hanks液洗滌3次，計數細胞后，用1640液重新懸浮細胞，配成所需濃度；
（4） 往各孔中加入0.5ml含不同濃度（104-106/ml）的細胞懸液，置37℃，5％CO2條件下孵育2-4h，甩去培養液，-T洗滌3次，每次3min；
（5） 往各孔中加入0.5ml生物素化抗體（Bio-Ab）（2μg/ml），37℃孵育1h或4℃過夜，甩去液體，-T洗滌3次，每次3min；
（6） 加入辣根過氧化物酶結合的親合素（Avi-HRP）（2μg/ml），37℃孵育30min，甩去液體，-T洗滌3次，每次3min；
（7） 配制明膠-底物液：在37℃水浴中，將2.5mlTMB溶液（4mg/ml甲醇溶液）滴加入7.5ml10%明膠溶液（用pH5.0磷酸鈉-檸檬酸緩沖液配制）邊加邊攪，溶液呈白色，加入14μl3%H202；
（8） 顯色與計數：將培養板底冰浴，每孔加入0.6ml明膠-底物液，約3min，混合液凝固，將培養板取出，置室溫5min，將板倒置，用肉眼和低倍放大鏡計數所顯示出的顏色斑點。