BECKMAN125型高效液相色譜儀使用的標準操作程序

發布時間：2019-12-13 12:35 原文鏈接： BECKMAN125型高效液相色譜儀使用的標準操作程序

1. 適用范圍

本標準適用于BECKMAN 125型高效液相色譜儀的使用操作。

2. 目的與意義

規范BECKMAN 125型高效液相色譜儀的使用操作，保證高效液相測量結果的準確性。

3. 責任

質量分析人員全面負責本SOP的實施。

4. 儀器的組成

本系統由SYSTEM GOLD? 125溶劑輸送泵、SYSTEM GOLD? 166檢測器（190～360 nm）、Rheodyne 7725i手動進樣閥、HT-330 柱溫箱、BECKMAN色譜工作站、打印機等組成。

5. 操作步驟

5.1. 準備

5.1.1 準備所需的流動相，用合適的0.45μm濾膜過濾，超聲脫氣20min。

5.1.2 根據待檢樣品的需要更換合適的色譜柱（注意方向）。

5.1.3 配制樣品和標準溶液，用合適的0.20μm濾膜過濾。

5.2. 開機

接通電源，依次開啟泵、檢測器開關，打開計算機進入win2000操作系統，雙擊桌面的32 Karat圖標進入主菜單對話框，雙擊instrument圖標進入色譜分析界面（包括Direct Control、Det166、Instrument Setup等界面）。

5.3. 創建分析方法

可在Direct Control界面直接點擊各設備單元的圖像進行流動相比例、流速、最大壓力限、最小壓力限、檢測波長以及檢測器開啟與關閉等參數的設定，亦可點擊“Methed/Instrument Setup” 進行相應的設定，然后點擊“File/Methed/Save As”保存設定的方法。

5.4. 更換流動相并排氣泡

將管路的吸濾器放入裝有流動相的儲液瓶中，逆時針轉動排液閥90～180°，打開排液閥；設流速為5ml/min，沖洗3min后設流速為0停泵，將排液閥順時針旋轉到底，關閉排液閥。如管路中沒有氣泡，則排氣泡操作可省略；如管路中仍有氣泡，則重復以上操作直至氣泡排盡。

5.5. 平衡系統

用流動相沖洗至基線漂移<0.001AU/min，噪聲為<0.0005AU時，可認為系統已達到平衡狀態，可以進樣。

5.6. 輸入樣品信息

點擊“Control/Single Run”，在Sanple ID（樣品名稱）、Method（方法）、Data path（保存路徑）、Data file（文件名）輸入相應的信息，然后點擊Submit提交。

5.7. 進樣

在“Direct Control”界面點擊“AutoZero”鍵調零；用進樣針定量吸取樣品溶液，在進樣閥處于“INJECT”狀態下插入進樣針；逆時針轉動進樣閥手柄，在“LOAD”狀態下推針進樣，再順時針轉動進樣閥手柄使其回至INJECT狀態即完成進樣操作。

5.8. 報告輸出與打印

在主菜單對話框內右擊“Instrument”圖標，點擊“open offline”進入離線分析界面。

5.8.1 系統默認報告格式：點擊“File/Data/New”打開相應文件后，點擊“Report/View/Area%”。

5.8.2 自定義報告格式：點擊“File/Data/New”打開相應文件后，在該界面中單擊鼠標右鍵，點擊“Graphical programming/Define Peaks”，在色譜圖中單擊自定義峰的起始和終點位置，點擊“File/Method/Save”進行方法保存；點擊“Report/Analyze”，進行自定義報告的分析；點擊“Method/Custom Report”，在彈出的界面中分別點擊“Insert field”、“Insert Graph/Data Graph”和“Insert Report/Run Report”即可分別插入常規信息、圖譜、數據，從而完成自定義報告。

完成報告輸出后，點擊“Report/Print/Area%”或者“Report/Print/ Custom Report”即可打印報告。

5.9 關機

5.9.1 測定完畢后，在Direct Control界面點擊檢測器圖標關閉紫外燈。

5.9.2 色譜柱的沖洗

5.9.2.1 反相柱（C₈、C₁₈）：流動相含鹽的（可將加酸、加三乙胺等情況并入），以乙腈-水（5：95）（乙腈可用甲醇代替，下同）沖洗30min（可視具體情況增加沖洗時間，下同），然后以乙腈沖洗20 min以上；流動相不含鹽的，以流動相沖洗10min以上，然后以甲醇沖洗20 min以上；流動相添加離子試劑的，以乙腈-水（5：95）沖洗45min以上，然后以乙腈沖洗20min以上。流速一般設為1ml/min。

5.9.2.2 正相柱：流動相含鹽的，以不含鹽流動相沖洗30min以上，再以正己烷沖洗20min以上（如流動相極性與正己烷有較大差異，可在流動相沖洗后，以異丙醇低速沖洗進行過渡，注意以異丙醇為流動相流速不得超過0.5ml/min，下同）；流動相不含鹽的，以流動相沖洗20min以上，再以正己烷沖洗20min以上。

5.9.3 停泵，逐級關閉工作站窗口，關閉計算機及儀器各部件電源開關。

5.10 填寫儀器使用記錄

6. 注意事項

6.1 流動相及樣品溶液必須用0.45um濾膜過濾，流動相還要進行脫氣處理。

6.2 進樣量最少為定量環體積的3至5倍，即20μl的定量環最少進樣60至100μl的樣品，這樣才能完全置換樣品定量環內殘留的溶液，達到所要求的精密度及重現性。推薦采用100ul的平頭進樣針配合20ul滿環進樣。

6.3 待泵的壓力穩定后，方可開啟檢測器。

6.4 試驗結束后，待泵的壓力逐步降為0后，方可關閉泵的電源。

6.5 仔細閱讀色譜柱說明書，保證色譜柱系統的適應性（流動相pH 2～8；柱壓小于2.5 KPSI）。