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  • 發布時間:2023-03-30 15:59 原文鏈接: BL21(DE3)表達的最佳條件是什么

    E.coli Electro-Cells
    E.coli Electro-Cell JM109

    制品名 TaKaRa Code 包裝量 價格(人民幣元)
    E.coli Electro-Cell JM109 D9022 1 Set (50 μl×10支) 300
    ■ Genotype
    E.coli JM109
    recA1, endA1, gyrA96, thi-1, hsdR17, supE44, relA1,
    Δ(lac-proAB)/F'[traD36, proAB+, lac Iq, lacZ ΔM15]

    ■ 細胞濃度
    1~2×1010 Bacteria/ml

    ■ 保存
    -80℃

    ■制品說明
    用高電壓脈沖電流瞬間擊穿大腸桿菌,從而導致DNA轉入大腸桿菌內的轉化方法稱為電穿孔法。電穿孔法是各種轉化方法中效率最佳的方法之一,比Ca2+處理的感受態細胞的轉化效率高,在轉化少量DNA時,特別能發揮其特有的威力。
    TaKaRa使用獨自開發的菌體培養法,制作出了效果極佳的E.coli Electro-Cell JM109。
    ■細胞種類
    α-互補性選擇宿主E.coli JM109
    E.coli JM109在使用pUC系列質粒載體進行DNA轉化或用M13 phage載體進行轉染時, 由于載體DNA產生的LacZα多肽和JM109 F'編碼的lacZΔM15的結合,顯示β-半乳糖苷酶活性 (α-互補性)。利用這一特性,可以很容易鑒別重組體菌株。因為具有F'質粒,除可用于制作基因庫、進行亞克隆等之外,也可作為M13載體DNA的宿主,調制單鏈DNA。

    ■質量標準

    使用10 pg的質粒DNA進行轉化時:
    50 μl E.coli JM109 Electro-Cell/10 pg pUC19 plasmid轉化時產生的菌落數
    >1×109 transformants/1 μg pUC19 plasmid
    F'質粒的穩定性檢測
    對E.coli JM109使用pUC19 DNA進行電穿孔法轉化后,在含有100 μg/ml的Ampicillin、0.2 mM的IPTG, 40 μg/ml的X-Gal的L-瓊脂平板培養基上,產生的白色菌落在1%以下。
    50 μl的E.coli JM109 Electro-Cell在含有100 μg/ml的Ampicillin L-瓊脂平板培養基上不產生菌落。

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    BL21(DE3)pLysS細菌菌株

    BL21(DE3)pLysS細菌菌株可以表達T7控制并核糖體結合位點的高效蛋白表達。BL21(DE3)pLysS對λDE3(1)是溶源性的。λDE3含有T7噬菌體基因I,編碼的T7 RNA聚合酶受lac UV5啟動子的控制。BL21(DE3)pLysS含有pLysS質粒,他攜帶編碼T7溶菌酶基因。在T7啟動子控制下,T7溶菌酶降低靶基因的背景表達但并不干擾由IPTG誘導的表達水平。

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