植物蛋白互作技術
我們的世界物種多種多樣，而與我們人類生存關系最密切的就是植物。隨著時間的推移與科技的進步，人類在逐步揭示自身基因真相的同時，也在不斷探尋植物基因的種種功能。其中，蛋白質是植物生命活動的主要承擔者。因此，在植物學相關研究中，蛋白質之間的相互作用是研究的重要基礎和手段。
目前，研究蛋白質-蛋白質相互作用常用方法主要包括：酵母雙雜交技術 (Yeast Two-hybrid,
Y2H)、雙分子熒光互補技術(Bimolecular Fluorescence Complementation,
BiFC)、免疫共沉淀技術(Co-Immunoprecipitation, CoIP)及熒光共振能量轉移技術(Fluorescence
Resonance Energy Transfer, FRET)等，以及近幾年來逐步應用到的螢火蟲熒光素酶互補技術(Firefly
luciferase complementation
面對眾多的技術，您是否也苦惱過，到底哪種技術更加適合我的實驗呢？要選擇哪些技術相互搭配才更加高效呢？面對這一連串的疑問，不要驚慌，今天小編準備了一篇技術簡報，一起了解一下各類蛋白互作技術。
酵母雙雜交技術(Y2H)：
酵母雙雜交技術是將待研究的兩種蛋白質分別克隆（融合）到酵母表達質粒的轉錄激活因子的DNA結合結構域（DNA-BD）和轉錄激活域（AD）上，通過2
個結構域的結合，從而調控目的基因的轉錄過程。這兩個結構域分開時仍分別具有功能，但不能激活轉錄，只有當被分開的兩者通過適當的途徑在空間上較為接近時，才能重新呈現完整的轉錄因子活性，并可激活上游激活序列（upstream
activating sequence，UAS）的下游啟動子，使啟動子下游基因得到轉錄。
優點：
① 操作簡單，方便快捷，實驗成本較低；
② 可快速、大量篩選蛋白互作組；
③ 靈敏度高，可檢測存在于微弱或暫時蛋白相互作用。
缺點：
① 自身轉錄蛋白往往會造成假陽性的結果；
② 蛋白過量表達時對酵母產生毒性，使得酵母無法正常生長；
③ 無法檢測細胞核外的蛋白互作。
雙分子熒光互補技術(BiFC)：
雙分子熒光互補技術本質上是一種蛋白質片段互補技術，是指將熒光蛋白多肽鏈切開并形成不發熒光的 N-和 C-末端2個多肽片段。當目標蛋白質相互作用時，2個片段重新構建成完整的具有活性的熒光蛋白分子，即可產生熒光。
優點：
① 靈敏度高，直觀可視；
② 可以對在動物、植物和細菌等不同的宿主細胞中蛋白進行定位和互作強度分析；
③ YFP,RFP等熒光標記選擇多樣。
缺點：
① 對溫度條件要求較高，溫度越低，越有利于片段之間的互補；
② 有時2個不發光的熒光片段會發生自發融合的情況，出現假陽性的結果。
