而后3-磷酸甘油酸消耗1分子ATP，在甘油酸激酶的作用下形成1,3-二磷酸甘油酸。又消耗1分子NADPH，形成3-磷酸甘油醛。之后在磷酸丙糖酶的作用下，形成3-磷酸丙糖。繼續消耗1分子ATP，重新形成RuBP。后來經過一系列復雜的生化反應，一個碳原子將會被用于合成葡萄糖而離開循環。剩下的五個碳原子經一系列變化，最后在生成一個1，5-二磷酸核酮糖，循環重新開始。循環運行六次，生成一分子的葡萄糖。
