實驗方法原理
實驗材料 1 mg ml 鈣調蛋白（- 70℃ 小量儲存）有 CaM 激酶活性的酶樣品10 mmol L 合成肽底物溶液
試劑、試劑盒 [γ-32P] ATP 溶液5 × CaM 激酶反應緩沖液
儀器、耗材 30℃ 水浴
實驗步驟
1. 對 1.5 ml 微量離心管做雙管標記，每個反應按以下比例加入各反應組分：
5 μl 5×CaM 激酶反應緩沖液
5 μl 10 mmol/L 合成肽底物溶液
5 [γ-32P] ATP 溶液（ATP 終濃度為 5 mmol/L， 放射活性為 5 μCi/μl）
5 μl 1 mg/ml 鈣調蛋白或 5 μl 水
0～30 μl 水
蓋好離心管，混勻，放入 30℃ 水浴溫育 10 min。
2. 每 30 s 一管依次加入 1～25 μl 酶樣品開始反應。加入酶量的容積取決于樣品中酶活性的大小。在預試驗中所得的最大反應值可衡量磷酸轉移反應的程度。在反應中為了保持磷酸基與底物的線性結合關系可適當減小酶的加量。
3. 30℃ 水浴，10 min。
4. 溫浴 10 min 后迅速吸取 30 μl 管中溶液滴在準備好的 P81 膜上。
注意事項
1. 實驗中每個反應的容積為 50 μl， 但它可為 25～100μl，只需根據比例對各反應組分進行適當調整。每個反應應分別設立無鈣調蛋白的對照，以便能評估磷酸轉移的反應本底，從而精確檢測 Ca2+/鈣調蛋白依賴性的磷酸轉移反應。
2. 由于多肽不能被 TCA 有效沉淀，而進行 PAGE 分析需要一些特殊技術。因此，只有吸附在 P81 磷酸纖維膜上才能用于 CaM 激酶介導的磷酸轉移測定。