在親和力篩選的基礎上，研究利用DELFIA EuTDA-based cytotoxicity assay（貨號AD0116）在細胞水水平探究變體對ADCC的提升。以不同FcγRIIIa基因型的PBMCs為效應細胞，Her2+ SkBr3為靶細胞，研究證明改造的變體能有效提升ADCC（2-3個數量級），與親和力數據趨勢一致（下圖左）。進一步的研究證明變體能有效引發針對HER-2不同表達水平的細胞株的ADCC。針對幾乎沒有抗原表達的MCF7細胞系，變體依然具有客觀的ADCC活力（下圖右）。
除了基因水平多態性外，Fc區域的糖基化也影響其和FcγR的親和力。尤其是巖藻糖的缺失會提升IgG1和FcγRIIIa之間的親和力。因此，除了突變外，改造Fc區域的糖基化修飾也是提升治療性抗體ADCC活力的一個途徑。以由羅氏研發的Lumretuzumab單抗（RG7116）為例[6]。RG7116一方面阻斷HER3的激活并下調HER3的表達。進一步通過羅氏去巖藻糖修飾的GlycoMab技術改造，RG7116和FcγRIIIa之間的結合親和力提高50倍。基于DELFIA技術的ADCC檢測證明，糖基化改造顯著提升RG7116的ADCC活力（下圖左）。同時，對比不同HER3表達量的細胞系，研究清晰地表明HER3受體表達豐度和RG7116介導的ADCC活力之間的正相關聯系（下圖右）。在動物模型上，基于多種低免疫細胞浸潤的小鼠皮下瘤模型，研究發現RG7116僅通過靶向HER3就能發揮抗癌作用。進一步利用高免疫細胞浸潤的異種原位移植A549肺癌小鼠模型，研究證明糖基化改造有效提升小鼠的生存周期。臨床一期試驗進一步證明RG7116的臨床療效。一方面，RG7116有效抑制了腫瘤細胞膜HER3的表達。同時，相較于未糖基化改造的抗體，RG7116升高外周NK免疫細胞的活化程度[7]。
免疫治療領域之首個PD-1抗體： Nivolumab
雖然同是單抗藥物，PD-1抑制劑與常見的靶向藥物作用機制不同。PD-1抗體主要用于阻斷PD-1和其配體PD-L1的相互作用，而不是殺傷PD-1陽性細胞，也就是抗腫瘤效應細胞。在Nivolumab的體外表征分析研究中，DELFIA Cell Cytotoxicity Kit（貨號AD0116）被用于確認Nivolumab是否會誘導ADCC產生。以活化的PBMCs為效應細胞，高表達PD-1的CD4陽性細胞為靶細胞，研究人員確認IgG4亞型的nivolumab不會誘發ADCC效應[8]。后續的實驗進一步證明nivolumab不能介導CDC，因此nivolumab的引入不會清除PD-1陽性細胞群體。除了nivolumab外，其他的PD-1單抗，包括默沙東的Keytruda、百濟神州的BGB-A317及恒瑞的SHR-1210,都為弱ADCC活性設計。然而，同樣是免疫檢查點抑制劑，CTLA-4單抗Ipilimumab則需要其ADCC活性來殺傷Treg細胞發揮作用，強調了不同作用機制對抗體ADCC活性的要求也有區別[9]。
ADCC活力的檢測不僅能協助解析單抗藥物的MOA，也推動對于NK細胞功能的研究及開辟新的抗腫瘤策略。作為成熟的細胞殺傷檢測工具，DELFIA? EuTDA（貨號AD0116）細胞毒法不僅可用于評估抗體的ADCC和CDC活力，還能用于檢測ACT，CAR-T和CAR-NK等療法中免疫細胞的殺傷能力。為了助力免疫治療的開發，我們近期推出“珀金埃爾默生命科學試劑耗材平臺”，加速您的研究和藥物開發進程。