實驗概要
Southern技術是指以Southern名字命名的DNA轉移雜交技術。它可用于基因組特定DNA序列的定位，可以測定相關片段的同源性、可以從c庫、基因組文庫中篩選完整基因等。用一種或多種限制性內切酶對基因組DNA加以切割，通過瓊脂糖凝膠電泳分離酶切片段，隨后，使DNA在原位變性，并從凝膠轉移至固相膜，用已知核苷酸片段加以標記作為探針，通過分子雜交來檢測待測樣品中是否存在互補的核酸序列。該技術已成為分子生物學中一類重要的檢測手段。下面介紹利用DIG試劑盒進行雜交的方法。
主要試劑
變性液 ：0.5MNaOH、1.5MnaCl
中和液：0.5Mtris-HCL，pH7.0、3MnaCl
20×SSC溶液
預雜交液：Blocking溶液（試劑盒帶）
雜交液（含5-25ng/ml，DIG標記探針的預雜交液）
low stringence buffer(2×SSC，0.1%SDS)
high stringence buffer(0.5×SSC，0.1%SDS)
洗滌液（0.1M馬來酸，0.15MNaCL，pH7.5，0.3%Tween-20，）
抗體溶液（含1/5000的DIG標記堿磷酶的Blocking溶液）
平衡液（0.1MTris-HCl，0.1MNaCL pH 9.5）
顯色液（平衡液中含2％BCIP/NBT儲存液）
BCIP/NBT儲存液(試劑盒帶)
主要設備
分子雜交儀、搖床、 烤箱、取液器、電泳儀、電泳槽
實驗步驟
1. 轉膜
1) 電泳
2) 切膠 在紫外下，切取凝膠有條帶部分
3) 脫嘌啉0.25NHCl浸泡凝膠10分鐘，蒸餾水洗膠（大于15kb的DNA片段轉移時做此步驟）
4) 變性，變性液（0.5MNaOH、1.5MNaCl）浸泡凝膠2次，每次15分鐘，蒸餾水洗膠
5) 中和，中和液（0.5MTris-HCl，pH7.0、3MNACl）浸泡凝膠2次，每次15分鐘，蒸餾水洗膠
6) 平衡，凝膠在20×SSC中室溫平衡10分鐘
7) 轉膜，取一塑料盒，將一干凈玻璃板橫架于盒上，盒中倒入10×SSC，作為轉移緩沖液，將2張大小合適的濾紙用20×SSC溶液浸濕，放置于玻璃板上，作為濾紙橋
將處理好的凝膠切去多余部分并切下一角作標記，膠面反轉放置于濾紙橋上，四周用Parafilm膜封閉，以防短路
剪取一塊面積稍大于凝膠的硝酸纖維素膜（NC膜），以2×SSC溶液浸濕后置于凝膠上
剪取2塊相應大小的濾紙，以2×SSC溶液浸濕后置于NC膜上
（濾紙、凝膠、NC膜、濾紙間都不能有氣泡）
濾紙上面放一疊吸水紙，上面壓一塊玻璃板，再壓上500g左右的重物，轉移過夜
8) 烤膜，轉移結束后，NC膜在與凝膠切角相對處，用鉛筆做記號，用6×SSC溶液室溫漂洗5分鐘，以充分洗去沾上的凝膠成分，吸水紙吸干殘余液體，室溫晾干，NC膜用濾紙夾裹好，80℃烤膜2小時
9) 烤干的NC膜用２×SSC浸潤。
2. 雜交
1) 預雜交，將烤好的NC膜放入一個比膜稍大的塑料袋中，按100cm2/10ml的比例加入適量的預雜交液，趕走氣泡，封口機封口，42℃預雜交30分鐘
2) 雜交，倒掉預雜交液，按100cm2/10ml加入雜交液，42℃雜交過夜
3. 檢測
1) 準備好一個塑料盒，放入100mllow stringence buffer，將雜交后的NC膜取出，置于上述溶液中，室溫晃動5分鐘
2) 取新鮮的low stringence buffer，重復上述操作一次
3) 將NC膜取出，置于65℃預熱的100ml high stringence buffer，65℃晃動15分鐘
4) 取新鮮的high stringence buffer，重復操作一次
5) 將NC膜轉移至塑料盒中，內含洗滌液，室溫晃動2分鐘，倒掉洗滌液。
6) 加入100mlBlocking溶液，室溫晃動30分鐘，以除去沒有特異結合的探針，倒掉Blocking溶液
7) 加入20ml抗體溶液，室溫晃動30分鐘，倒掉溶液
8) 用洗滌液室溫晃動洗滌2次，每次15分鐘，以除去多余的抗體，倒掉洗滌液
9) 平衡，加入20ml平衡液，室溫放置3分鐘，倒掉平衡液
10) 顯色，加入10ml顯色液，顯色，目標條帶顯色后用50mlTE終止反應。