主要用于顯示基因以及其他序列待征在基因組上位置的圖。
| 實驗方法原理 | 應用遺傳學技術構建能顯示基因以及其他序列待征在基因組上位置的圖。 |
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| 實驗材料 | DNA |
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| 試劑、試劑盒 | 限制酶緩沖液 |
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| 儀器、耗材 | 電泳儀 |
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| 實驗步驟 | 1. 用低頻率切割的不同限制性內切酶分別完全消化DNA。 2. 從每個反應取小份樣品作電泳分析，用已知的分子量標準作對照。剩余的樣品置于冰浴。 3. 比較分子量標準估算出DNA片段的長度，推導出每種限制性內切酶的酶切位點數目。 4. 從1的每個樣品管中取少許置另外的管中，用第二種內切酶消化，電泳分析比較酶切結果。
（1）兩種酶切割。
（2）第一種酶單獨切割。
（3）第二種酶單獨切割。
5. 估算DNA片段的長度，重復此步驟，直到明確一致而且相互不矛盾的限制性內切酶位點被推導出來，DNA圖譜便告完成。 收起 |
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| 注意事項 | 1. 建立一個標準的酶切反應。
2. 帶切割的DNA應當已除去酚、氯仿、乙醇、EDTA、去污劑或過多鹽離子的污染，已干擾酶的活性。
3. 酶切反應液應充分混合。 |
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