DNA印跡雜交分析實驗

本方案適合于用100~1 000 bp 長的放射性標記的DNA探針對Southern轉印、斑點及狹線印跡進行雜交分析。

DNA

SDS SSC

水浴鍋 培養箱

1.  用6×SSC潤濕帶有固定了的DNA的膜。

2.  將膜的DNA面朝上置于雜交管中，ATP溶液的加入量為約1 ml/cm² 膜，在68℃雜交爐中滾動3 h。

3.  在預雜交即將結束時，于100℃將DNA探針變性10 min，置于冰中。

4.  將雜交管中的APH溶液倒掉，換上等體積的預熱的APH溶液（68℃），加入變性探針，68℃滾動下雜交過夜。

5.  倒掉APH液，加入等體積的2×SSC/0.1%SDS，室溫下滾動溫育10 min。5 min后更換洗膜液。

6.  用等體枳的0.2×SSC/0.1%SDS替換上述洗膜液，室溫下滾動溫育10 min 后更換洗膜液

7.  如果需要，在42℃，0.2×SSC/0.1%SDS進行15 min 中等嚴緊度的洗膜2次。

8.  如果需要，在68℃，0.1×SSC/0.1%SDS進行15 min 高等嚴緊度的洗膜2次。

9.  倒掉最后的洗膜液，在室溫下用2×SSC漂洗膜，并吸干多余的液體，用塑料膜包裹后放射自顯影。