1、操作時戴手套,嚴禁用手接觸凝膠和硝酸纖維素膜,
2、轉移時,濾紙與膜、膜與凝膠、凝膠與濾紙橋之間均不能有氣泡,否則影響DNA轉移,
3、凝膠易碎,操作時應格外小心,
4、硝酸纖維素膜上的DNA固定非常重要,固定不好時DNA·在雜交過程中會脫落下來,烤膜溫度過高,膜脆性增加,易碎,
5、大片段DNA轉移效率低,可在堿變性前用0.25mol/L HCl浸泡凝膠10,15分鐘,使DNA分子脫嘌呤或用短波(260mm)紫外光照射10,20分鐘后再行堿變性、轉移以提高大片段DNA的轉移效率。
6、轉移液中鹽離子濃度對轉移有較大影響。10×SSC條件適中,能有效地轉移 1,20kb的DNA片段,速度也比20×SSC快,比較常用,6×SSC轉移速度最快,·對于高分子量DNA片段(>10kb)的轉移較理想,但小分子DNA易丟失。若轉移DNA片段較小 ,則宜選用20×SSC。因此應根據不同目的選擇適當的轉移液。