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  • 發布時間:2021-08-27 20:28 原文鏈接: DNA合成儀原理

    DNA的固相合成。
    即DNA3'端固定于基質上,然后沿3'向5'方向依此添加核苷酸直至合成所需的DNA片段。不同于應用DNA聚合酶的DNA合成。

    合成過程
    個堿基的3‘末端固定在樹脂上,下一個堿基的5’-OH用二對甲氧三苯甲基DMT保護,堿基上的氨基用苯甲酸保護,然后對3‘-OH用氨基磷酸化合物進行活化。
    1。1個堿基的5’-OH和下個堿基的3‘-OH形成亞磷酸三酯,
    2。然后用碘氧化成磷酸三酯
    3。加入CHCl2COOH除去第二個堿基5’-OH上的保護劑DMT
    循環進行加入下一個堿基
     

    合成完畢后
    1。用苯硫酚除去5’-OH上的保護劑DMT
    2。用濃氫氧化銨將片段與固體樹脂斷開,洗脫
    3。用濃氫氧化銨在加熱的條件下除去堿基上的保護劑
    4。除去氫氧化銨,真空抽干
    5。液相色譜或者PAGE,回收片段長的。




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