1、4—6微米切片,用防脫片膠（多聚賴氨酸）處理過的玻片貼附
2、56—60℃烤片2—16h
3、新鮮二甲苯脫蠟,10minX2（趁熱脫蠟）
4、100%乙醇5minX2次,不用浸水,直接空氣干燥
5、加入50μl蛋白酶K工作液（蛋白酶K用蒸餾水稀釋,濃度為25μg/ml）,37℃消化10—15min
6、棄去蛋白酶K工作液,0.1MTBS洗滌3minX3次逐級酒精脫水（85%,95%,100%酒精）1minX3次然后空氣干燥
7、加入20μl探針,加蓋薄膜。（探針用預雜交液稀釋,濃度為5μg/ml）。
8、95℃變性10—12min；立刻置于冰塊上,防止復性。
9、37℃雜交16—20h
10、揭去薄膜,每張切片加入以下雜交后洗滌液：
>用2—3滴2XSSC37℃洗滌3minX2次；
>0.5XSSC37℃洗滌3minX2次；
>0.2XSSC37℃洗滌3minX2次；
11、0.1MPBS/TBS緩沖液洗滌,1minX3次
12、滴加小鼠抗地高辛生物素標記的抗體工作液,37℃孵育45—60min；
13、0.1MPBS浸洗,5minX3次
14、滴加高敏堿性磷酸酶鏈親和素復合物工作液,37℃孵育45—60min。
15、0.1MPBS浸洗,5minX3次
16、滴加NBT/BCIP顯色6—16h,
17、雙蒸水終止反應（37℃10min—2h）,雙蒸水浸洗,5minX2次
18、滴加核固紅,30秒—5min；
19、雙蒸水浸洗,5minX3次
20、脫水、透明、封片