酚-氯仿方法是提取核酸的經典方法,主要原理是利用核酸、蛋白等雜質在水相和有機相中溶解度不同而重新分配。
試劑盒原理是在特定溶液環境下(高鹽、低pH)使核酸吸附在固相介質(一般是硅膠膜)上,洗滌去除雜質后,再改變溶液環境使DNA溶解到純水或TE中。
酚氯仿方法經典、便宜,用的都是實驗室常用試劑,提純效率和純度都很高,但缺點是費時費力,苯酚和氯仿還有一定毒性,我見過的實驗室很少有用這種方法的。
試劑盒嚴格來說也分好多種,經典的是離心柱的,就是把硅膠膜固定在離心管中,類似于超濾膜,用離心力或者負壓讓液體通過硅膠膜,核酸就留在膜上。在經過洗滌、洗脫的步驟得到核酸。這種方法的優點是操作簡單、時間短,現在也能達到很高的質量,價格也不貴。缺點是不易放大,需要多次離心。
試劑盒基本步驟是先使樣本裂解,在特定溶液中通過離心流過硅膠膜,再經過幾次洗滌,最后加上洗脫液,離心后核酸就溶解到洗脫液中。具體的你可以根據你自己的需要到網上查一下說明書,現在做試劑盒公司的很多,步驟大同小異。
試劑盒也不是一定很便宜,對一些難度高(病毒核酸、法醫樣本核酸)或者要求高(去內毒素)的用途也比較貴。還有一種磁珠法提取,不需要離心,易于放大,可以用于自動化操作。這種高端一點的產品基本上是外國公司壟斷的。