DNA顯示和細胞有絲分裂相的觀察

核酸是生物最重要的組成成分,核酸分為兩大類,即脫氧河塘核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)。它們在細胞內的分布及化學性質均有所不同。DNA主要分布在核的染色質或有絲分裂過程中出現的染色體內。RNA分布在細胞質和核仁內。但在染色質及染色體中也含有少量的RNA，核仁中也有少量的DNA。在線粒體，葉綠體等細胞器內除含有RNA外，也含有少量的DNA。

一、 目的與要求
了解Feulgen反應的基本原理，學習其操作方法和壓片法，初步掌握細胞分裂各期的主要特點。
二、 原理
Feulgen反應的原理是根據DNA經弱酸（1mol/L）水解后，打開料嘌呤和脫氧核糖連接的鍵，在脫氧核糖的一端形成有離的醛基。這些醛基就在原位與Schiff試劑結合，形成含醌基（ ）的化合物，醛基是一個發色團所以具有顏色，因此凡有DNA的部位，就呈現紫紅色。
三、 實驗內容
1．DNA的顯示法-Feulgen反應
2．壓片法
3．細胞有絲分裂相的觀察
四、 實驗步驟
（一） DNA的顯示法-Feulgen反應
以蠶豆根尖或洋蔥根尖為材料,進行Feulgen反應的具體操作程序如下:
切取根尖
↓ 長度0.3-0.5cm
Camoy固定劑
↓ 固定10-30分鐘
95%酒精
↓ 10分鐘
70%酒精
↓10分鐘
蒸餾水 →(對照)5%三氯醋酸
↓ ↓90oC15分鐘
1mol/L HCl← 蒸餾水
↓ 室溫
1mol/L HCl
↓60 oC8分鐘
Schiff試劑
↓40 -60分鐘
亞硫酸水(1,2,3)
↓換3次,每次5分鐘
自來水
↓將染色后的根尖漂洗干凈,懸著染色效果好的材料
蒸餾水
↓
壓片
↓
鏡檢
(二) 壓片法
壓片的操作步驟如下,把根尖放在載片上,用刀片切取根尖(0.3cm),縱切根尖,加一滴水,用解剖針將根尖縱向分成若干小條,保留1-2小條,加蓋玻片,用鉛筆端輕輕敲擊蓋玻片,使細胞分離、壓平呈云霧狀。
（三） 蠶豆（或洋蔥）根尖壓片的觀察
首先在低倍鏡下，區分根尖的分生組織區及延長組織區的細胞，然后，在高倍鏡下，觀察細胞核的形態，注意在你的片子上，是否有有絲分裂細胞，如有，你能找到細胞分裂期的幾個階段，其特征如何？（可參照附錄）
（四） 做Feulgen反應時，應注意的幾個問題
（1） 固定劑的選擇：一般常選用Carnoy固定液。其他的固定劑如Flemming固定劑及Champy固定劑等均可用，但不能使用Bouin固定劑。
（2） 水解時間：水解時間一定要合適，不宜過長或不足，否則會影響實驗結果。如用Carnoy固定液固定的材料，水解時間一般在8－15分鐘之間。水解時間的長短要隨不同的材料及不同的固定劑而定。
（3） Schiff試劑的質量：在做Feulgen反應時，一個重要的成功因素就是Schiff試劑的質量問題。實驗時，要注意試劑顏色是否正常、有無SO2的氣味。
（4） 洗滌劑的重要性：漂洗時，所用的亞硫酸水，最好在每次實驗前臨時配制，以便保持較濃的SO2。
（5） 實驗對照組：一定要做對照片，以便說明實驗結果的真實性。
（6） 操作過程中，用鑷子鑷取根尖的生長區部位，切勿夾取根冠部位。
鴉片過程中盡量使根尖分生組織細胞保持原來的分布狀態。
附錄：植物細胞分裂的幾個時期。
細胞周期分為間期及分裂期，分裂期又稱有絲分裂期。
按照有無核膜，核仁、染色體，以及染色體形態與分布位置的變化，把細胞有絲分裂又分為前期、中期、后期和末期四個階段。現將各期特點簡述如下，
（1） 前期：此期明顯得變化是染色質螺旋盤繞成一定數目的細而長的染色絲，此即為染色體。染色體先是分散于核液中，以后，逐漸向核膜移動，在此時，核仁逐漸消失，核膜溶解。
（2） 中期：中期明顯得特征是染色體進一步盤繞。變短變粗，在細胞的中央規則地排列成行，此即赤道板，若仔細觀察，可以看到染色體兩側的紡錘絲。
（3） 后期：此期明顯得特征是相同的兩組染色體分別向細胞兩極移動，染色體達到兩極時染色體緊縮成團，染色體的輪廓逐漸變得不清楚，細胞質中間部位出現一個模板。
（4） 末期：末期的變化正好和初期相反，原來盤繞變粗的染色體又伸展開，故核內又呈現為比較均勻。此時，核仁、核膜又重新出現。
此外，間期細胞的細胞核有下述特點：核膜清楚，核內結構均勻，除異染色質外，可見1－2個著色較深的核仁。而在進入細胞分裂期的細胞核，一般均大于間期細胞核。