DNA核酸濃度的定量實驗可以用于（1）對純化的PCR產物進行濃度測定；（2）對純化的酶切產物進行濃度測定；（3）對提取的質粒進行濃度測定。
| 實驗方法原理 | 寡核苷酸，單鏈、雙鏈DNA，以及RNA可以定量溶于緩沖液，構成核酸的嘌呤堿和嘧啶堿具有共軛雙鍵，使核苷核和核酸在紫外線光具有特征性的吸收光譜，最大吸收峰為260nm。窄光帶紫外分光光度計，長260nm．，比色杯光徑1cm，1個吸光度值（1A）相當于50ug/ml雙螺DNA，40ug/m1單螺旋DNA或RNA），20 ug/ml寡核苷酸。
測試前，選擇正確的程序，輸入原液和稀釋液的體積，爾后測試空白液和樣品液。然而，實驗并非一帆風順。讀數不穩定可能是實驗者最頭痛的問題。靈敏度越高的儀器，表現出的吸光值漂移越大。
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| 實驗材料 | 樣本DNA |
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| 試劑、試劑盒 | 雙蒸水 |
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| 儀器、耗材 | 紫外分光光度計比色杯 |
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| 實驗步驟 | 1. 取DNA溶液10ul，加雙蒸餾水600ul（即稀釋61倍）。
2. 用雙蒸餾水調零，測定260nm和280nm的吸光度值（A260. A280）．
3. DNA濃度（ug／ul）＝A260x 50x 61／1000
4. DNA純度：A260/ A280的比值應大于1.7以上，若樣品中含有蛋白質（吸收峰在280nm）等雜質時，比值下降，應重新純化． |
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| 注意事項 | 在測試時，離子濃度太高，也會導致讀數漂移，因此建議使用pH值一定、離子濃度較低的緩沖液，如TE，可大大穩定讀數。樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素：由于樣品中不可避免存在一些細小的顆粒，尤其是核酸樣品。這些小顆粒的存在干擾測試效果。為了最大程度減少顆粒對測試結果的影響，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值最好在0.1-1.5A。在此范圍內，顆粒的干擾相對較小，結果穩定。從而意味著樣品的濃度不能過低，或者過高（超過光度計的測試范圍）。最后是操作因素，如混合要充分，否則吸光值太低，甚至出現負值；混合液不能存在氣泡，空白液無懸浮物，否則讀數漂移劇烈；必須使用相同的比色杯測試空白液和樣品，否則濃度差異太大；換算系數和樣品濃度單位選擇一致；不能采用窗口磨損的比色杯；樣品的體積必須達到比色杯要求的最小體積等多個操作事項。
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| 其他 | 除了核酸濃度，分光光度計同時顯示幾個非常重要的比值表示樣品的純度，如A260/A280的比值，用于評估樣品的純度，因為蛋白的吸收峰是280nm。純凈的樣品，比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白質或者酚類物質的影響。A230表示樣品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0。A320檢測溶液的混濁度和其他干擾因子。純樣品，A320一般是0。
本實驗來源于牡丹江醫學院《檢驗專業實驗指導》。 展 |
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