“鳥槍法”是一種由生物基因組提取目的基因的方法。首先利用物理方法(如剪切力、超聲波等)或酶化學方法(如限制性內切核酸酶)將生物細胞染色體DNA切割成為基因水平的許多片段,繼而將這些片段與適當的載體結合,將重組DNA轉入受體菌擴增,獲得無性繁殖的基因文庫,再結合篩選方法,從眾多的轉化子菌株中選出含有某一基因的菌株,從中將重組的DNA分離、回收。
這種方法也就是應用基因工程技術分離目的基因,其特點是繞過直接分離基因的難關,在基因組DNA文庫中篩選出目的基因。可以說這是利用“溜散彈射擊”原理去“命中”某個基因。由于目的基因在整個基因組中太少太小,在相當程度上還得靠“碰運氣”,所以人們稱這個方法為“鳥槍法”或“散彈槍”實驗法。
一、用限制酶切下目的片段的大片段InsertDNA,并用Agarose凝膠電泳進行回收。
二、對回收的大片段DNA用物理方法(如超聲波等)進行切斷處理,然后用T4DNAPolymerase對小片段DNA進行末端平滑化。
三、進行Agarose電泳,切膠回收1kbp~2kbp的小片段DNA。然后用BcaBestDNAPolymerase在DNA的3'端加上一個A堿基。
四、把加上A-tail的DNA片段連入T-Vector中,然后轉化,挑選克隆。
五、對陽性克隆(含1kbp~2kbpInsert)進行DNA測序。
六、對數據進行編輯,最后連成一條大片段的DNA序列。