DNA片段的亞克隆實驗——凝膠塊中DNA連接

DNA

TAE瓊脂糖

電泳儀離心機

1.  重復基本方案中的步驟1~5。

2.  在高質量的低融點膠中分離久DNA（0.7%，TAE緩沖液），切下體積盡可能小的所需DNA條帶（20~50 μl ）至小離心管中。

3.  在70℃融化低融點膠10 min 以上，每個連接反應在不同的試管中進行。

4.  在的體積中混合含適當DNA的凝膠塊（需要時用水補足）37℃放置數分鐘。
 

5.  加入11 μl 冰冷的含2×緩沖液、ATP和T4 DNA連接酶的混合物，并于15℃溫育1 ~48 h。

6.  在73℃重新融化膠5~10 min 取5 μl 連接產物加于200 μl 感受態大腸桿菌，見基本方案中的步驟8。

7.  重復基本方案中的步驟9。