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  • 發布時間:2019-03-26 17:57 原文鏈接: DNA片段探針的應用實驗——甲酰胺法

    所謂探針,一般是指用來檢測某一特定核苷酸序列或基因序列的DNA片段或RNA片段。但要使探針DNA片段能實際應用,必須使DNA或RNA分子帶上可識別的信號標志,以便跟蹤觀察探針與其同源的核苷酸序列發生雜交反應的位置,被探測DNA或RNA片段上的大小、雜交信號的強弱等。目前應用最多的是核素標記方法或非核素標記方法。

    實驗材料

    DNA

    試劑、試劑盒

    雜交液洗膜液

    儀器、耗材

    注射器超聲儀水浴鍋

    實驗步驟

    1.  用5~20 ml 雜交液Ⅰ依次浸泡10~20張硝酸纖維素濾膜。濾膜裝入雜交袋中,加入足夠的雜交液,密封后42℃預雜交1 h。

     

    2.  往帶螺蓋的試管中,加入放射性探針和2 mg 超聲波處理的鯡魚精DNA,煮沸10 min。

    3.  探針混合液移至冰浴,加入2 ml 雜交液Ⅰ 。

    4.  用帶18-G針頭的注射器將探針混合液加入到雜交袋中濾膜上,重新密封后于42℃溫育過夜。

    5.  用約500 ml 低嚴緊性洗膜液Ⅰ于室溫洗滌濾膜3次,每次10~15 min。

     

    6.  再用約500 ml 高嚴緊性雜交液Ⅰ(預熱到洗滌溫度)洗滌濾膜2次,每次15~20 min。


    7.  用塑料保鮮膜將濕潤的濾膜包裹好,或讓它貼在一塑料板上干燥后進行放射自顯影。


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