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  • 發布時間:2019-03-25 15:54 原文鏈接: DNA純化實驗——PCR清潔試劑盒純化法

    實驗方法原理

    硅膠膜可在高鹽條件下結合DNA,又可在低鹽條件下與DNA分離。用于清潔目的的含DNA溶液中的引物、單核苷酸、酶、礦物油、鹽離子等雜質因為沒有與DNA相似的特性,所以被分離開來。

     

    實驗材料

    PCR產物

    試劑、試劑盒

    PCR清潔試劑盒

    儀器、耗材

    96孔DNA制備板96孔深孔板96孔V型底板

    實驗步驟

    一、試劑盒組成、貯存、穩定性
     

    1.  說明書,耗材:96孔DNA制備板,96孔1.6 ml深孔板,96孔V型底板。
     

    2.  Buffer PCR-A:DNA結合溶液。室溫密閉貯存。若出現沉淀,應于65℃溫浴溶解并冷卻至室溫后再使用。
     

    3.  Buffer W2 concentrate:去鹽液。使用前,根據瓶上指定的體積加入乙醇,混合均勻,室溫密閉貯存。可用100%乙醇或95%無水乙醇。
     

    4.  Eluent:2.5 mM Tris-HCl,pH 8.5。室溫密閉貯存。
     

    二、操作步驟
     

    用戶可以選擇負壓法或離心法。
     

    A. 負壓法
     

    1A.  正確連接負壓裝置,將96孔DNA制備板置于負壓裝置上;在PCR、酶切、酶標或測序反應液中,加3個體積的Buffer PCR-A(若Buffer PCR-A不足100 ul,加至100 ul);混合均勻后轉移到96孔DNA制備板中,開啟并調節負壓至-25-30英寸汞柱,緩慢吸掉板中溶液。
     

    2A.  加0.3 ml Buffer W2,吸盡管中溶液。以同樣的方法再用0.3 ml Buffer W2洗滌兩次。
     

    * 確認在Buffer W2 concentrate中已按試劑瓶上的指定體積加入無水乙醇。
     

    3A.  保持負壓將96孔DNA制備板抽吸10 min。
     

    4A.  導流管朝下將96孔DNA制備板于長纖維性紙巾上用力拍擊6次。
     

    5A.  將96孔DNA制備板置于96孔V型底板上,在膜正中央加25-30 ul 水或Eluent,室溫靜置1 min。3 000xg離心5 min洗脫DNA。
     

    B. 離心法
     

    1B.  在PCR、酶切、酶標或測序反應液中,加3個體積的Buffer PCR-A(若Buffer PCR-A不足100 ul,加至100 ul);混勻后,轉移到96孔DNA制備板中,將96孔DNA制備板置于96孔1.6 ml深孔板中,1 000xg離心1 min,棄濾液。
     

    2B.  在96孔DNA制備板中,加0.3 ml Buffer W2,1 000xg離心1 min,棄濾液。以同樣的方法再用0.3 ml Buffer W2洗滌一次。
     

    * 確認在Buffer W2 concentrate中已按試劑瓶上的指定體積加入無水乙醇。
     

    3B.  將96孔DNA制備板置于96孔1.6ml深孔板中,3 000xg離心10 min。
     

    4B.  將96孔DNA制備板置于潔凈的96孔V型底板中,在膜正中央加25-30 ul水或Eluent,室溫靜置1 min。3 000xg離心5 min洗脫DNA。

    收起 
    注意事項

    1.  將洗脫液或水加熱至65℃,有利于提高洗脫效率。
     

    2.  DNA分子呈酸性,建議在2.5 mM Tris-HCl,pH8.5洗脫液中保存。


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