DNA純化實驗

實驗方法原理

硅膠膜可在高鹽條件下結合DNA，又可在低鹽條件下與DNA分離。用于清潔目的的含DNA溶液中的引物、單核苷酸、酶、礦物油、鹽離子等雜質因為沒有與DNA相似的特性，所以被分離開來。

實驗材料 PCR產物

試劑、試劑盒 PCR清潔試劑盒

儀器、耗材 96孔DNA制備板96孔深孔板96孔V型底板

實驗步驟

一、試劑盒組成、貯存、穩定性

1.   說明書，耗材：96孔DNA制備板，96孔1.6 ml深孔板，96孔V型底板。

2.  Buffer PCR-A：DNA結合溶液。室溫密閉貯存。若出現沉淀，應于65°C溫浴溶解并冷卻至室溫后再使用。

3.  Buffer W2 concentrate：去鹽液。使用前，根據瓶上指定的體積加入乙醇，混合均勻，室溫密閉貯存。可用100%乙醇或95%無水乙醇。

4.  Eluent：2.5 mM Tris-HCl，pH 8.5。室溫密閉貯存。

二、操作步驟

用戶可以選擇負壓法或離心法。

A. 負壓法

1A.  正確連接負壓裝置，將96孔DNA制備板置于負壓裝置上；在PCR、酶切、酶標或測序反應液中，加3個體積的Buffer PCR-A（若Buffer PCR-A不足100 μl，加至100 μl）；混合均勻后轉移到96孔DNA制備板中，開啟并調節負壓至-25-30英寸汞柱，緩慢吸掉板中溶液。

2A.  加0.3 ml Buffer W2，吸盡管中溶液。以同樣的方法再用0.3 ml Buffer W2洗滌兩次。

* 確認在Buffer W2 concentrate中已按試劑瓶上的指定體積加入無水乙醇。

3A.  保持負壓將96孔DNA制備板抽吸10 min。

4A.  導流管朝下將96孔DNA制備板于長纖維性紙巾上用力拍擊6次。

5A.  將96孔DNA制備板置于96孔V型底板上，在膜正中央加25-30 μl水或Eluent，室溫靜置1 min。≥3 000×g離心5 min洗脫DNA。

B. 離心法

1B.  在PCR、酶切、酶標或測序反應液中，加3個體積的Buffer PCR-A（若Buffer PCR-A不足100 μl，加至100 μl）；混勻后，轉移到96孔DNA制備板中，將96孔DNA制備板置于96孔1.6 ml深孔板中，1 000×g離心1 min，棄濾液。

2B.  在96孔DNA制備板中，加0.3 ml Buffer W2，1 000×g離心1 min，棄濾液。以同樣的方法再用0.3 ml Buffer W2洗滌一次。

* 確認在Buffer W2 concentrate中已按試劑瓶上的指定體積加入無水乙醇。

3B.  將96孔DNA制備板置于96孔1.6ml深孔板中，≥3 000×g離心10 min。

4B.  將96孔DNA制備板置于潔凈的96孔V型底板中，在膜正中央加25-30 μl水或Eluent，室溫靜置1 min。≥3 000×g離心5 min洗脫DNA。

注意事項

1.   將洗脫液或水加熱至65°C，有利于提高洗脫效率。

2.  DNA分子呈酸性，建議在2.5 mM Tris-HCl，pH8.5洗脫液中保存。