DNA是細胞內含量比較恒定的參量,隨著細胞增殖周期的各時相而發生變化。熒光染料(如PI)可選擇性地定量嵌入核酸(DNA/RNA)的雙螺旋堿基之間,與細胞特異性結合,DNA含量與熒光染料的結合量成正比,因此通過測定熒光強度可獲知細胞的增殖情況。
1. 將固定過的細胞離心(500~1000rpm,5min)棄上清液,再用PBS洗滌2次。
2. 用PBS調整細胞濃度,每份為1×106個細胞/100μl。
3. 加入1000μl DNA 熒光染料(通常用Coulter公司提供的DNA染色試劑盒),室溫下避光染色15 min。
4. 上流式細胞儀檢測。
樣品的制備可分析細胞周期各時相的百分比,同時可粗略觀察有無凋亡細胞現象,如果用對照液(雞紅細胞)作參照標準,可進行細胞DNA倍體分析,通過DNA指數(DNA index,DI)衡量DNA的相對含量,DI可用下式計算:
DI=樣品G0/G1期的均值/正常二倍體細胞G0/G1期均值 展開 |