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  • 發布時間:2019-04-04 10:40 原文鏈接: DNA熒光染色的樣品制備實驗

    試劑、試劑盒

    PBS

    儀器、耗材

    DNA熒光染料流式細胞儀

    實驗步驟

    DNA是細胞內含量比較恒定的參量,隨著細胞增殖周期的各時相而發生變化。熒光染料(如PI)可選擇性地定量嵌入核酸(DNA/RNA)的雙螺旋堿基之間,與細胞特異性結合,DNA含量與熒光染料的結合量成正比,因此通過測定熒光強度可獲知細胞的增殖情況。

    1. 將固定過的細胞離心(500~1000rpm,5min)棄上清液,再用PBS洗滌2次。

    2. 用PBS調整細胞濃度,每份為1×106個細胞/100μl。

    3. 加入1000μl DNA 熒光染料(通常用Coulter公司提供的DNA染色試劑盒),室溫下避光染色15 min。

    4. 上流式細胞儀檢測。

    樣品的制備可分析細胞周期各時相的百分比,同時可粗略觀察有無凋亡細胞現象,如果用對照液(雞紅細胞)作參照標準,可進行細胞DNA倍體分析,通過DNA指數(DNA index,DI)衡量DNA的相對含量,DI可用下式計算:

    DI=樣品G0/G1期的均值/正常二倍體細胞G0/G1期均值

    展開


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