DNA連接酶的缺點

無3’→5’閱讀校正功能，在PCR擴增過程可引起錯配，30次循環錯配率約0.25%。

措施：選擇高保真Taq酶，如Pfu。

原因：Pfu具有3’→5’外切酶活性。

注意：Pfu擴增產物為平末端。