很多人都有上面這樣的想法吧?其實我當初也這樣的,結果呢?怎么也提不好,一提提了好幾個月呢。DNA 提取還真是說起來容易、做起來難。
首先大家得明確一點,DNA 是遺傳信息的載體,獲得高分子量、高純度的 DNA 是你開展后續測序、雜交等實驗的前提。所以,注意了,要高分子量、高純度哦。我相信肯定有很多人一開始提取的時候,DNA 的濃度是不合格的。
要想做好,其實是有一些技巧的,接下去師姐要開始放大招了。
1. 我有一個習慣,當實驗遇到問題的時候,喜歡把實驗原理和流程研讀幾遍,每個環節逐一分析。真正的實驗高手不僅僅是會按實驗流程操作,他還懂得每一步的原理,這就是格物致知——知其然更知其所以然。
2. 樣品和試劑的檢查。樣品是否反復凍融?樣品采集是否合格?試劑是否是現配?這些需要確定,尤其是臨床上的樣品,可能并非你親自采集,更要確認其合格。實驗中所有的試劑和耗材均要避免核酸酶污染,防止 DNA 降解。
3. 樣品量增加是否可以增加 DNA 濃度?資料顯示,樣品量過多會影響細胞裂解,繼而導致 DNA 含量的降低。那么怎么樣的量比較合適呢?一個是咨詢你的師姐,一個是自己摸索,可以做一個樣品量對應的 DNA 濃度曲線。
4. 動作要輕柔。高溫水浴時要注意定時且輕柔,千萬別指彈 PCR 管,會引起 DNA 機械斷裂。使用移液器吹打及其他操作也要輕柔,避免帶來傷害,DNA 真的很脆弱。
5. DNA 沉淀是否充分。一般沉淀用的是異丙醇或 70%乙醇,基本原理就是 DNA 不溶于他們。一個是要控制他們的量和延長沉淀時間,還有一點就是可以將異丙醇或 70%乙醇預冷,因為 DNA 不溶于異丙醇和乙醇,尤其在低溫條件下。
6. DNA 洗滌要小心。傾倒上清、留取沉淀的步驟中一定要緩慢小心進行。
掌握以上幾點,我想你提取 DNA 一定圓滿成功。如果還有問題,請加我的微信號:biotalk,備注分子克隆,我就會通過。