• <table id="4yyaw"><kbd id="4yyaw"></kbd></table>
  • <td id="4yyaw"></td>
  • 發布時間:2019-07-06 23:17 原文鏈接: E玫瑰花環形成試驗(ERosetteTest)

    【原理】 
    正常人外周血中T細胞在體外能直接和綿羊紅細胞(SRBC)結合形成玫瑰花樣細胞團,這是因為人的T細胞膜具有能和SRBC膜上的糖蛋白相結合的受體,稱為E受體。已證實E受體是人T細胞所特有的表面標志,也是T細胞的常用方法之一。 
    【材料】 
    肝素抗凝人外周血1ml 
    淋巴細胞分層液(見附錄)2ml 
    0.5%SRBC:懸液將脫纖維的綿羊靜脈血用Hanks液洗3次,在用Hanks液配制為含壓積SRBC為0.5%的懸液(約含SRBC 3×107/ml)。 
    經SRBC吸收及滅活的新生小牛血清(NBS):取無菌NBS置56℃水浴經30 min滅活;取已滅活的NBS 2體積,加入經洗滌后的壓積SRBC 1體積,混勻后置37℃溫箱30 min,離心沉淀,吸取上層血清即成。 
    Hanks液;pH 7.4(見附錄)。 
    血球計數板、毛細滴管、載玻片、微量加樣器、光鏡、瑞氏(Wright’s)染液等。 
    【方法】 
    1.  取肝素抗凝血1ml加1ml Hanks液,混勻后用毛細滴管將其加在2ml分層液上。 
    2.  離心2000 rpm,30 min,用毛細滴管吸取血漿與分層液界面處富含淋巴細胞的懸液置于另一潔凈試管中。
    3.  用Hanks液以1000 rpm,離心10 min洗細胞2次,末次棄上清后再加入Hanks液1ml,混勻,用微量加樣器吸取0.02 ml加于0.38 ml白細胞計數液中,在血球計數板上于低倍鏡下計數,并根據下式算出每毫升細胞數。

    然后用Hanks液配制成107/ml細胞懸液。
    4. 取107/ml細胞懸液0.1 ml加0.1 ml經SRBC吸收和滅活的NBS,再加0.2 ml 0.5% SRBC懸液,混勻,放37℃溫箱5 min,然后放4℃冰箱2 h或過夜。
    5. 取出試管,輕輕使沉淀的細胞懸浮,用毛細滴管取出一滴置于載玻片上蓋上已滴加瑞氏染液的蓋玻片,于高倍鏡下觀察計數。
    【結果觀察】
    計數200個淋巴細胞,凡結合3個SRBC以上者為E玫瑰花陽性細胞,求出百分率為T細胞百分比。正常值為68±9.9%。
    【注意事項】
    SRBC自綿羊體內取出后限在2周內使用。

  • <table id="4yyaw"><kbd id="4yyaw"></kbd></table>
  • <td id="4yyaw"></td>
  • 调性视频