E玫瑰花環形成實驗

肝素抗凝人外周血

淋巴細胞分層液 SRBC懸液 Hank's液 NBS

血球計數板 尖吸管 載玻片 瑞氏染液

1.  取肝素抗凝血1 ml 加1 ml Hank's 液，混勻后用尖吸管將其加在2 ml分層液上。
 

2.  離心2000 rpm，30 分鐘，用尖吸管吸取血漿與分層液界面處富含淋巴細胞的懸液置于另一潔凈試管中。
 

3.  用Hank's 液以1000 rpm，離心10 分沖洗細胞兩次，末次棄上清后再加入Hank's液1 ml，混勻，用微量加樣器吸取0.02 ml 加于0.38 ml 白細胞計數液中，在血球計數板上于低倍鏡下計數，并根據下式算出每毫升細胞數。然后用Hank's液配制成10⁷ /ml細胞懸液。

4.  取10⁷ /ml細胞懸液0.1 ml加0.1 ml經SRBC吸收的滅活NBS，再加0.2 ml0.5 %SRBC懸液，混勻，放37 ℃溫箱5 分鐘，低速離心500 rpm，5 分鐘，然后放4 ℃冰箱2 小時或過夜。
 

5.  取出試管，輕輕使沉淀的細胞懸浮，用尖吸管取出一滴置于載玻片上，蓋上已滴加瑞氏染液的蓋玻片，于高倍鏡下觀察計數。

1.  SRBC 自綿羊體內取出后限在2 周內使用。

一、實驗結果
 

計數 200 個淋巴細胞，凡結合3 個SRBC 以上者為E 玫瑰花陽性細胞，求出百分率即為T 細胞百分比。正常值為68±9.9%。