E玫瑰花環形成試驗的原理及方法

實驗概要

本實驗介紹了E 玫瑰花環形成試驗()的原理及方法。

實驗原理

正常人外周血中T  細胞在體外能直接和綿羊紅細胞(SRBC)結合形成玫瑰花樣細胞團。這是因為人的T 細胞膜上具有能和SRBC 膜上的糖蛋白相結合的受體，稱為E  受體。已證實E 受體是人T 細胞所特有的表面標志，因此本試驗可作為人外周血T  細胞的鑒定和計數，同時作為人細胞免疫功能狀態的一個檢測指標，也是分離T 細胞的常用方法之一。

主要試劑

1. 淋巴細胞分層液2ml
2. 0.5%SRBC懸液：將脫纖維的綿羊靜脈血用Hank's液洗3 次，再用Hank's液配制為含壓積SRBC為0.5%的懸液(約含SRBC 8×10⁷／m1)。
3. 經SRBC 吸收的滅活的新生小牛血清(NBS)，取無菌NBS 置56℃水浴經30分鐘滅活，取已滅活的NBS 2 體積，加入經洗滌后的壓積SRBC l 體積，混勻后置37℃溫箱30 分鐘，離心沉淀，吸取上層血清即成。
4. Hank's 液：pH7.4

主要設備

1. 血球計數板

2. 尖吸管

3. 載玻片

實驗材料

肝素抗凝人外周血1ml

實驗步驟

1. 取肝素抗凝血1ml 加1ml Hank's 液，混勻后用尖吸管將其加在2m1 分層液上。
2. 離心2000rpm，30 分鐘，用尖吸管吸取血漿與分層液界面處富含淋巴細胞的懸液置于另一潔凈試管中。
3. 用Hank's 液以1000rpm，離心10 分沖洗細胞兩次，末次棄上清后再加入Hank's液1ml，混勻，用微量加樣器吸取0.02ml 加于0.38ml 白細胞計數液中，在血球計數板上于低倍鏡下計數，并根據下式算出每毫升細胞數。

然后用Hank's液配制成10⁷／ml細胞懸液。
4. 取107／ml細胞懸液0.1ml加0.1ml經SRBC吸收的滅活NBS，再加0.2ml0.5%SRBC懸液，混勻，放37℃溫箱5 分鐘，低速離心500rpm，5 分鐘，然后放4℃冰箱2 小時或過夜。
5. 實驗結果
計數200 個淋巴細胞，凡結合3 個SRBC 以上者為E 玫瑰花陽性細胞，求
出百分率即為T 細胞百分比。正常值為68±9.9%。

注意事項

SRBC 自綿羊體內取出后限在2 周內使用。

附    件   (共2個附件,占77KB)

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