EADTalk|庖丁解牛，看EAD技術解碼酰基異構體定量

Hey，大家好，我是您的質譜應用專家劉婷，20年的一線應用經驗，讓我深感到質譜應用信息共享的重要性。無論是質譜前沿技術，還是常用技術的深入應用，都希望在我的這個專欄中能和大家分享。“婷視角，看分析“希望拓寬您的視野，進入美妙的的質譜應用世界。

大家好，我們又見面了。上期內容，我們介紹了甘油三脂酰基位點對于營養學和消化吸收的重要意義，以及EIEIO技術如何使用酰基特征碎片對其進行定性和定量分析。EIEIO技術的簡便性就在于無需優化色譜分離，且方法設定簡單，大大提高了分析效率。本期內容，我們將追隨上期的腳步，繼續介紹EIEIO技術在脂質酰基異構體定量分析中的應用。

本期內容

EIEIO的酰基位點特征碎片，不僅可用于甘油三酯的酰基異構體定性和定量分析，還可以用于其他脂質。SCIEX科學家Takashi在文獻¹中就使用EIEIO技術定量兩種磷脂酰膽堿-酰基異構體OPPC (PC(18:1(9Z)/16:0))和POPC (PC(16:0/18:1(9Z))不同比例的標準品混合物，分別使用OPPC和POPC的甘油骨架上C₁-C₂鍵斷裂的特異碎片m/z465和m/z491進行定量測定，測定值和實際混合比例相符(見圖3)。傳統方法定量這兩個異構體的瓶頸在于色譜分離，EIEIO技術使用特征碎片定量，跳過了這一瓶頸，大大縮短了色譜方法開發時間。

圖1. (a) OPPC的EIEIO甘油C₁-C₂位點裂解碎片m/z 465; (b) POPC的EIEIO甘油C₁-C₂位點裂解碎片m/z 491; (c) 基于m/z 465和m/z 491測定OPPC在混合中的百分比 (測量POPC標準品純度為80%,購買標準品純度為83-87%)¹.

2023年1月，國內多位專家合作，在PNAS《美國科學院院報》上發表了關于內質網磷脂酸（PA）如何轉運至葉綠體進一步合成糖脂的植物發育機制研究文章²。文章中使用ZenoTOF^? 7600中的EIEIO技術的特殊碎片對單半乳糖二酰基甘油（MGDG）的酰基鏈位置進行了鑒定和定量分析，實驗結果發現：擬南芥突變體中MGDG sn-2位上的C18脂肪酰基顯著降低，從而證明了兩個目標蛋白在體內具有將PA從內質網特異性轉移到葉綠體的能力(見圖2)。

圖3. 文獻²中使用EIEIO 對Sn-2位置進行定量，突變體Sn-2位置的18:2和18:3脂肪鏈顯著性降低.

上述實驗中的MGDG sn-1, sn-2位酰基異構體定量，其傳統方法比較復雜。首先是將樣品中的脂質提取物，跑TLC (Thin Layer Chromatography) 薄層色譜板，分離出MGDG條帶，然后將該條帶從薄層板上扣下，使用PLA1酶按照標準方法酶切, 獲得sn-1位脂肪酸，后將這些脂肪酸衍生化，進行GC (gas chromatography，氣相色譜法) 或GC-MS (gas chromatography-mass Spectrometer，氣相色譜質譜法) 定量。全程處理步驟多，時間長，關注點多，且需要較大樣品量，這無疑限制了研究速度。EIEIO技術與其相比，它的優勢就是無需復雜的前處理過程，且采集方法無需色譜分離，操作簡單高效。

聽了本期內容，相信大家對EIEIO在脂質酰基位點的定性和定量應用有了較深入的理解！最后，我們來總結一下本期的內容：

1EIEIO的酰基位點特征碎片，可用于多種脂質的定性、定量工作；

2通過酰基異構體傳統定量方法和EIEIO方法的比較，新技術簡化前處理和方法開發時間，促進科學研究；

本期的主要內容，就到這里了。下期內容，我們將介紹EAD技術在脂肪鏈雙鍵位點上的應用。

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參考文獻

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1. J. Larry Campbell and Takashi Baba. Near-Complete Structural Characterization of Phosphatidylcholines Using Electron Impact Excitation of Ions from Organics. [J]. Anal. Chem. 2015, 87, 5837?5845.

2. Hong-Yan Yao, Yao-Qi Lu, Xiao-Li Yang, Xiao-Qing Wang, Zhipu Luo, De-Li Lin, Jia-Wei Wu, Hong-Wei Xue. Arabidopsis Sec14 proteins (SFH5 and SFH7) mediate interorganelle transport of phosphatidic acid and regulate chloroplast development. [J]. Proc Natl Acad Sci U S, 2023 Feb 7;120(6).