ELISA實驗前必做的儀器和試劑準備

ELISA技術自20 世紀70年代初問世以來，發展非常迅速，目前被廣泛應用于免疫學、醫學、生物學等許多領域。其基本原理是根據抗原或抗體能在一定條件下結合到固相載體的表面仍保持其免疫活性，抗原或抗體與酶結合形成的結合物仍能保持免疫學和酶的活性。結合物與相應的抗原、抗體結合后，可根據加入相應的酶底物的顏色反應來判斷有無相應的免疫反應，而且顏色的深淺與相應的抗原或抗體的量在一定的范圍內成正比。由于抗原、抗體的反應在1 種固相載體——聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應物，從而保證實驗結果的特異性與穩定性。了解實驗原理后同時也必須做好實驗的前期準備。

一、儀器準備：

酶標儀（ELISA Reader），微量可調加樣器1套（10、20、100、200、1000 μL），恒溫培養箱，pH 計，沖洗器，洗滌瓶，康氏管，50 mL燒杯，吸管。96孔酶標板或48孔酶標板。

二、試劑準備：

1）包被液：0.05 M pH9.6碳酸鹽緩沖液（Na2CO3 1.59 g, NaHCO3 2.93 g, 加水至1000 mL，4℃可保存1周）。
2） 封閉液：5％ 脫脂奶粉或0.3％ BSA
3）洗滌液：0.15 M pH7.4 PBS-T（0.2 g KH2PO4,2.9 g Na2HPO4?12H2O,8 g NaCl, 0.2 g NCl,0.5mL Tween-20,加水至1000 mL，4℃保存）
4）底物液：pH5.0 的磷酸鹽-檸檬酸緩沖液（0.1 M 檸檬酸24.3 mL，0.2 M磷酸鹽25.7 mL，加水50 mL，混勻），臨用前，在上述緩沖液中溶解40 毫克鄰苯二胺（Ortho-Phenglendiaruine, OPD），然后加入30%雙氧水0.15 毫升，底物對光敏感，需要避光并立即使用。
5） 陽性對照液：1：100用HAT培養基稀釋的小鼠血清。陰性對照液為HAT培養基
6） 辣根過氧化物酶標記的羊抗鼠IgG 酶標結合物。
7） 2 M H2SO4
8） 抗原溶液