包被原的性質很重要
這關系到做出的抗體可不可以被其識別，所以保存抗原很重要，做重組蛋白時，要在冰浴下緩慢消融。還有有的包被原可能不是蛋白，關于生物素和脂類物質或小分子物質咱們要事前對其改造再加以包被。
1、親和素生物素：先親和素先包被載體，參加生物素化的DNA，這種包被辦法均勻、牢固，已擴大應用于各種抗原物質的定量測定。
2、脂類物質：可將其在有機溶劑中溶解后參加ELISA板孔中，開蓋置冰箱過夜或涼風吹干，待酒精蒸發后，讓脂質天然干固在固相外表。
3、小分子有必要依托和大的蛋白載體偶聯后才能固定在固相載體上。
包被液的挑選
因為蛋白質與聚苯乙烯固相載體是經過物理吸附結合的，靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與固相載體外表的疏水基團間的作用，這種物理吸附對錯特異性的，受蛋白質的分子量、等電點、濃度等的影響，大分子蛋白質較小分子蛋白質一般含有更多的疏水基團，故更易吸附到固相載體外表。具體的實驗還要有鞏固的理論外也要實踐，看一下最終可不可以應用到自己實驗當中去。常用的包被液除了方才說到的pH9.6碳酸鹽緩沖液，還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。
加抗體標本(和二抗)
留意該換槍頭時換槍頭。標本稀釋一般可用pbs稀釋，也可用封閉液去稀釋。如需加二抗，還要留意二抗的作業濃度，太低則上色淺。
顯色
我們一開始做的時分，要挑選適合的顯色體系。留意顯色體系酶活性底物的保存HRP結合物加硫柳泵，AP結合物可加疊氮鈉。每次做盡量要把陰陽空三個對照做好，如出現問題也好剖析。