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  • 發布時間:2020-06-15 11:04 原文鏈接: Elisa技術的優越性(一)

    測定生物體內各種微量有機物的方法很多,大致可分為三類:即物理、化學、免疫學方法。在物理學分析方法中,主要借助于高精度的儀器設備,如紫外分光光度計、質譜儀、氣相色譜儀和高壓液相色譜儀等。應用這些儀器設備,雖然可以檢出體內較微量的有機物(可檢出范圍在10-6mol/L~10-12mol/L間),但因操作復雜、費時,而且檢測成本較高,因此不利于在生產中推廣應用。

     

    化學方法主要根據待測物與其他物質的化學反應、產生顏色變化來進行。該方法是最早用于定量測定生物體內微量有機物質的基本方法。但因其檢出的靈敏度低(要求采樣很多)、特異性差,而且操作麻煩,因此也不利于推廣應用。

     

    普通免疫學測定方法很多,最大的優點是特異性強,其弱點是靈敏度相對較差,而且操作麻煩,不利于進行大規模測定。60年代發展的RIA技術在靈敏度方面得到了發展,可檢出生物體內10-6mol/L~10-12mol/L濃度的超微量有機物。相對而言,RIA技術是這些免疫測定技術中較先進的一種,因此評價Elisa技術的優缺點時,常以RIA技術做參照。

     

    RIA技術中用作指示劑的標記物為放射性同位素,而檢測放射性同位素需要昂貴的儀器設備和輻射防護設備,并需有專門從事放射性同位素工作的實驗室和放射性廢物處理裝置,操作人員的健康常常受放射線照射的威脅。另外,就RIA質量而言,盡管目前靈敏度已達pg/ml水平(即每毫克樣本中含被測物微微克),但不可能有太大的改進,因而其發展前景不大。此外,作為RIA指示劑的某些放射性同位素,由于半衰期短,如32P只有14.3天,33P只有25天,125I只有60天,因而限制了RIA試劑的保存時間。

     

    與RIA技術比較而言,Elisa技術在上述方面表現出如下優越性:

     

    (一)靈敏度高

    雖然酶活性調節Elisa方法的靈敏度目前并不十分理想,但在酶活性放大Elisa中,檢測的靈敏度遠比RIA高。根據質量作用定律。即免疫反應所形成的免疫復合物量與反應物濃度成正比。推測所檢測的待測物分子數為1。已知1個摩爾濃度含6.02×1023個分子,那么理論推測酶活性放大Elisa方法的最低檢測限可達1.7×10-24mol/L。雖然在實際應用中由于反應條件和試劑純度以及儀器精度等因素的影響,往往達不到這個水平(大于104個分子),但表明Elisa在靈敏度方面的改進潛力是很大的。

     

    (二)特異性強

    從免疫反應的角度來說,Elisa與RIA的特異性應該是一致的。但在Elisa方法中,由于作用檢測指示劑的酶與其底物的反應有專一性,從而增加了該方法的特異性。

     

    (三)對儀器設備要求不高,測定成本低

    Elisa測定在普通實驗室便可進行,常用的儀器設備包括加樣器、培養箱、酶標專用讀數器等。按現有價格折算,酶標儀的價格只及液閃儀的1/6至1/4,因此每測定一個樣本所需成本不及PIA的1/10至1/16。某些定性Elisa方法,還可在野外進行,操作十分方便。

     


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